中药提取液在大鼠附睾精子冷冻保存中的应用效果 - 江苏农业科学.pdf

江苏农业科学　２０１４年第４２卷第３期 — １４５— 聂晓伟，谈　勇，徐福松，等．中药提取液在大鼠附睾精子冷冻保存中的应用效果［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（３）：１４５－１４７． 中药提取液在大鼠附睾精子冷冻保存中的应用效果 １ １ １ １ １ １ ２ 聂晓伟 ，谈　勇 ，徐福松 ，刘承勇 ，陈　娟 ，钱　云 ，王公金 （１．南京中医药大学第一附属医院生殖医学科，江苏南京２１００２９；２．江苏省农业科学院畜牧研究所，江苏南京２１００１４） 　　摘要：对菟丝子、淫羊藿水提液进行分离纯化，并将水提液加入大鼠精液冷冻保护剂中，对大鼠附睾尾部精子进行 冷冻保存，并评估冷冻前后精子活率指数，采用伊红染色评估精子畸形率。结果表明：添加菟丝子、淫羊藿水提液的冷 冻保护剂可以提高解冻后精子活率指数。菟丝子、淫羊藿水提液在大鼠精液冷冻保存过程中有一定的保护作用。 　　关键词：淫羊藿；菟丝子；大鼠；附睾精子；精子活率指数 　　中图分类号：Ｒ３２１．１　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）０３－０１４５－０３ 　　精液冷冻保存技术已有２００多年的历史。人的精液冷冻 淫羊藿滤液浓缩至２ｇ／ｍＬ（每ｍＬ药液相当于２．００ｇ生药 保存可以追溯到２０世纪４０年代末。目前，精液冷冻保存在 量）。将浓缩滤液 ２５００ｒ／ｍｉｎ离心 ２０ｍｉｎ，取上清液 我国主要应用于人类精子库，目前，已经建立了较为成熟的精 ２００ｍＬ，加入等量蒸馏水稀释后过夜，２５００ｒ／ｍｉｎ离心 液冷冻保存体系。全国各生殖中心对人精液冷冻保护剂的需 ２０ｍｉｎ后再３００００ｒ／ｍｉｎ高速离心２０ｍｉｎ，提取上清液最终 求量比较大，市场上人精液冷冻保存剂几乎全部被国外的生 定量为菟丝子０．５ｇ／ｍＬ（每ｍＬ药液相当于０．５０ｇ生药量）， 物公司所垄断，国内只有部分科研院所自行配制畜禽精液冷 淫羊藿滤液浓缩至１．００ｇ／ｍＬ（每ｍＬ药液相当于１．０ｇ生药 冻保护剂，还没有我国自行开发的人类精液冷冻保护剂应用 量）。将上清液经０．４５ ｍ滤器过滤，冷藏保存备用。 μ 于临床。笔者前期研究表明，对少弱精患者进行精液冷冻保 １．２．２　固体物质含量测定　取菟丝子、淫羊藿水提取液各 存，可以获得尽可能多的处理后活动精子总数（ＰＴＭＳ），并应 ２ｍＬ，置恒重的称量瓶中，于 １２０℃电热恒温干燥箱中干燥 用于宫腔内人工授精（ＩＵＩ），使更多的患者可以接受ＩＵＩ技术 ３ｈ，使溶液缓慢挥发，直到其中的固体成分完全干燥为止，准 治疗，减少治疗费用，让不孕不育患者以最小的代价获得妊 确称量，重复２次，取平均值。溶液固含量计算见公式（１）： ［１］ 娠 。现有的人类精液冷冻保存系统适合人的正常精液。 固含量＝干燥后固体重量／溶液总重量×１００％ （１） 本研究探讨中药水提液对大鼠精液冷冻保存效果，旨在为冷 １．２．３　稀释液的配制　３７５．０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ（５１．１１ｍｇ／ｍＬ）＋ 冻保存少弱精患者精液提供参考。 １２４．０ｍｍｏｌ／Ｌ柠檬酸（２６．０６ｍｇ／ｍＬ）＋４１．０ｍｍｏｌ／Ｌ葡萄糖 （８．１２ｍｇ／ｍＬ）。５０ｍＬ稀释液含２．５５５５ｇＴｒｉｓ＋１．３０３ｇ柠 １　材料与方法 檬酸＋０．４０６ｇ葡萄糖。用３７５．０ｍｍｏｌ／ＬＴｒｉｓ将稀释液的ｐＨ １．１　材料 值调整到７．０，用三蒸水将渗透压调整到３７５ｍＯｓｍ。 １５周龄清洁级ＳＤ雄性大鼠（南京医科大学实验