实时荧光定量pcr(taqman)法测定外源基因的拷贝数.pdf

广 西 植 物 Guihaia 29(3)：408—412 2009年 5月 实时荧光定量 PCR(TaqMan)法 测定外源基因的拷贝数 王爱民1， (1．徐州师范大学 生命科学学院，江苏 徐州 221116；2．江苏省药用植物生物技术重点实验室 ，江苏 徐州 221116) 摘 要：实时荧光定量 PCR是近年新兴的一项技术 ，因其快速、方便、便宜，需要 DNA样品量少 ，无需放射性 检测等优点被广泛应用于基因的定量分析。该文就实时荧光定量 PCR(TaqMan)技术的发展、基本原理及测 定外源基因拷贝数的技术流程做一介绍。 关键词：外源基因；拷贝数；实时荧光定量PCR 中图分类号 ：Q943 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—3142(2009)03—0408-05 E…stimati·●ngcopyam h’er0tntransgem●cgeneb’y real-timefluorescentquantitativePCR(TaqMan) Ⅵ NG Ai—Min1，2 (1．SchoolofLifeScience，XuzhouNormalUniversity，Xuzhou221116，China；2．JiangsuProvincial KeyLaboratoryofBiotechnologyforMedicinalPlant，Xuzhou221116，China) Abstract：Real-timefluorescentquantitativePCRiSanewtechniquewhichhasbeendevelopedtObeusedinquantita— tiveanalysisofgenesaswellwiththeadvantagesofsimpleness，quickness，shortneedsoftargetfragmentDNA and noneofhazardousradioisotopesinrecentyears．Thedevelopment，theprincipleofreal—timefluorescentquantitative PCR(TaqMan)andthetechinicalflow ofestimatingcopynumberoftransgenicgeneareintrouducedinthispaper． Keywords：transgenicgene；copynumber!real—timefluorescentquantitativePCR 传统测定基因拷贝数的方法是 SouthernBlot— (1)不需要进行 PCR的后处理，最大限度的减少 了 ting。事实证明它确实是一个行之有效的、准确的 操作过程中可能导致的污染；(2)快速 ，便宜；(3)避 方法，但在实际操作过程 中我们也不难发现，它费 免使用具有危害的放射性同位素；(4)仅需要少量的 时、费力，同时还需大量的DNA样 品，甚至要使用 DNA样品；(5)提供一个广泛的定量动力学范围，能 放射性同位素(Mason等，2003)。近年兴起的实时 对拷贝数差异较大的不同样品进行精确定量。由于 荧光定量 PCR(real—timequantitativepolymerase 该技术不仅实现 了PCR从定性到定量的飞跃 ，而且 chainreaction，real—timequantitativePCR)技术弥 与常规 PCR相 比，它具有特异性更强、有效解决 补了以上的不足 (Ingham等 ，2001；Song等，2002； PCR污染问题、自动化程度高等特点，目前已得到 Mason等，2003)。实时荧光定量 PCR技术是在 广泛应用。 1996年由美国AppliedBiosystems公司推 出，它通 过在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号