油松过氧化物酶季节变化动态 - 生态环境学报.doc

油松过氧化物酶季节变化动态 李 毳 山西财经大学环境经济系，山西 太原 030006 采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，对华北地区14个油松种源的过氧化物酶（POD）季节变化动态进行了分析。电泳共分离出8条谱带，其中一条为油松的特征谱带，其余7条在不同生长季节均有较明显的变化，且不同种源间POD酶谱变化具有一定的差异，表明油松植物过氧化物酶具有季节性生长阶段的特异性和种源特异性。 油松；过氧化物酶；变化动态中图分类号： 文献标识码：A 文章编号：1672-2175（200）0-1996-03同工酶(isozyme)是指催化反应相同而结构及理化性质不同的一组酶，是基因直接表达的产物，酶谱的不同反映了构成酶蛋白质肽链的氨基酸顺序和组成的差异。目前关于同工酶的研究已积累了丰富的资料，形成了一整套完整的采样和数据处理方法，使整个生物界遗传多样性能够在共同的基础上进行比较。过氧化物酶(peroxidase)广泛分布于动物、植物和微生物体内，在植物正常生长发育和应激反应代谢中发挥着重要生理作用。对过氧化物酶分子结构、类型划分、基因表达和调控的分子机制已进行了深入的研究[1]，利用过氧化物酶分析种质资源、遗传育种、物种间亲缘关系以及在不同发育阶段酶的变化等也受到广泛关注[2]。 油松（Pinus tabulaeformis）广泛分布于我国华北地区，根系发达，适应性强，具有良好的水土保持效能，是荒山绿化和营建生态保护林的主要造林树种。利用过氧化物同工酶对松科内一些种的遗传结构、种源区划等方面的研究有过一些报道，利用其它同工酶对油松的遗传结构也有初步报道 [3-5]，但关于油松过氧化物酶的报道很少[6-7]。油松天然林经过长期的自然选择形成不同的自然类群，种群间和种群内的遗传变异都很丰富[8-9]。由于过氧化物酶成份和结构复杂、功能多种多样性、不同生长时期种类和含量都有变化，因此对其应当从宏观和微观的多个层次进行研究，进一步提高对其在植物发育过程中的功能的认识。 从山西太岳龙门口（P1）、中条中村（P2）、吕梁上庄（P3）、太行铁桥（P4）、陕西洛南（P5）、陕西黄龙桥山（P6）、山西黑茶山（P7）、山西灵空山（P8）、河北平泉（P9）、辽宁千山（P10）、河北雾灵（P11）、山西吕梁克城（P12）、芦芽山（P13）和关帝三道川（P14）共14个不同种群采取油松种子。2005年5月在太原市苗圃育苗，2006年4月2日开始，每月采样一次，对14 个油松种群的过氧化物同工酶进行分析，实验至10月结束。每次每株采取油松幼苗4~5个针叶，装入冰壶带回实验室。 称取油松针叶1.0 g，剪碎后放入研钵，加pH 5.6磷酸缓冲液4 mL，冰浴研磨，12 000 r/min 离心10 min，取上清液备用。 采用不连续聚丙烯酰胺凝胶垂直平板电泳，分离胶质量分数为9%，浓缩胶质量分数为3% 。电极缓冲液为Tris-Gly（pH8.3），4 ℃电泳，开始稳压120 V，样品进入分离胶后，用200 V稳压电泳至指示剂到达凝胶底部1 cm。采用醋酸联苯胺活性染色法，0.2 mol/L醋酸钠、5 mmol/L硫酸锰、φ=0.12% H2O2和联苯胺-愈创木粉（270 mg 愈创木粉+100 mg联苯胺+5 mL冰醋酸+45 mL蒸馏水）。染色液按20:20:5:5比例混合而成，现配现用，室温下显色2 min左右，至棕色酶带清晰。 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术得到14个油松种源4-10月份的过氧化物酶谱，根据电泳迁移率将酶带依次分为A、B、C、D、E、F、G、H带，不同种源同一季节和同一种源不同季节的酶谱均呈现一定的变化（图1）。D带为所有供试材料的共有带，说明D带所代表的过氧化物酶类比较稳定，可作为油松的特征谱带；5月所采样品的检测结果中，大多数种源有A带和B带，6月之后这两条带逐渐消失；E带在4-5月仅出现在个别种源，6月在更多的种源出现，8月以后所有种源都出现E带；F带在4月很少，5月逐渐增加，6-7月比较稳定，各种源油松均有，8-9月在个别种群消失；G带是一个明显不同于其它条带的宽带，6月在P1、P2、P3、P4和P5种群开始出现，7月以后越来越多的种群都有此带出现，10月达到最多。总的看来，条带数目在4-6月变化较大，6月以后酶谱变化相对较小。在整个观测阶段呈现出大相对分子质量的谱带波动不稳定，小相对分子质量谱带逐渐增加，中等相对分子质量的谱带相对比较稳定的趋势。这种变化在一定程度上反映了油松在不同生长季节过氧化物酶基因表达的时空顺序。 Fig. 1 Seasonal change of isozyme peroxidase of P. tabulaeformis from different provenances. P1～P14代表