附件-食品微生物之检验方法.doc

食品微生物之檢驗方法－肉毒桿菌之檢驗 101年5月16日署授食字第1011901882號公告 第一部份：肉毒桿菌及其毒素之檢驗 1. 適用範圍：本方法適用於食品中肉毒桿菌及其毒素之檢驗。 2. 實驗室生物安全措施： 2.1. 生物危害標幟應懸掛於實驗室入口處，並管制人員進入，以及將該實驗區之人數維持至最低需求。 2.2. 備有治療用肉毒桿菌抗毒素之醫療院所緊急連絡電話號碼應張貼在明顯處。 2.3. 實驗操作應在生物安全操作櫃進行。 2.4. 應有洗眼用噴水器及腳踏或自動式洗手設備。 2.5. 絕不可以用口吸取任何檢體，應以機械式吸管輔助器操作。 2.6. 工作前、後應以1%次氯酸溶液擦拭工作檯。 2.7. 實驗後，工作人員應將所使用過之器材及廢棄物，立即滅菌處理。 3. 檢驗方法：檢體經前處理後，經增菌，續以選擇性培養基培養，配合肉毒桿菌毒素檢測與型別鑑定之方法。 3.1. 工作環境：工作平檯須寬敞、潔淨、光線良好，操作平檯光度為100呎燭光以上，密閉室內換氣良好，儘可能沒有灰塵及流動空氣。每15分鐘落菌數不得超過15 CFU／培養皿。 3.2. 器具及材料： 3.2.1. 生物安全操作櫃（Biological safety cabinet, BSC）：第二等級（class II）（含）以上者。 3.2.2. 高壓滅菌釜。 3.2.3. 乾熱滅菌器。 3.2.4. 冰箱：能維持5 ± 3℃者。 3.2.5. 培養箱：能維持內部溫度溫差 ± 1℃以內者。 3.2.6. 天平：可稱量到 2000 g 者，靈敏度為 0.1 g ；可稱量到 120 g 者，靈敏度為5 mg。 3.2.7. 旋渦混合器（Vortex mixer）。 3.2.8. 加熱板（Hot plate）。 3.2.9. 顯微鏡：能放大至1000倍之一般光學顯微鏡。 3.2.10.吸管輔助器（Pipette aid）。 3.2.11.微量吸管（Micropipette）：10 μL、20 μL、200 μL及1000 μL。 3.2.12.酸鹼度測定儀（pH meter）。 3.2.13.水浴：能維持水溫溫差在 ± 0.2℃以內者。 3.2.14.培養皿：已滅菌，內徑約 90 mm ，深度約 15 mm ，底皿之內外面應平坦，無氣泡、刮痕或其他缺點。 3.2.15.吸管尖頭（Tip）：可滅菌。 10 (L、 20 (L、 200 (L及 1000 (L。 3.2.16.吸管（Pipette）：已滅菌，1 mL吸管應有0.01 mL之刻度；5 mL及 10 mL吸管應有0.1 mL之刻度。 3.2.17.容器：附螺旋蓋之玻璃、聚乙烯、鐵弗龍或其他能耐 121℃ 溼熱滅菌20分鐘以上之三角錐瓶、玻璃瓶或廣口瓶，125 mL、250 mL、500 mL及 2 L 。 3.2.18.附螺旋蓋試管：10 × 100 mm ，13 × 100 mm ，15 × 150 mm 試管，或其他適用者。 3.2.19.載玻片及蓋玻片：適用於染色及鏡檢用。 3.2.20.接種針及接種環（直徑約3 mm）：鎳鉻合金，鉑銥或鉻線材質，或可拋棄式者。 3.2.21.厭氧瓶（Anaerobic jar）。 3.2.22.氣體包：適合厭氧菌培養者。使用時，反應30分鐘後，厭氧瓶內空氣組成為氧氣含量低於1%，二氧化碳含量介於9～13%。 3.2.23.離心管及微量離心管：已滅菌，15 mL、50 mL、0.2 mL、2.0 mL。 3.2.24.注射筒：1 mL、3 mL，附25號，5/8吋注射針。 3.2.25.小鼠：雄性，體重16～24 g。 3.2.26.小鼠用籠子、飼料、飲水瓶等。 3.2.27.藥勺、剪刀、鑷子、開罐器、缽及杵臼：可滅菌。 3.2.28.無菌濾膜：孔徑 0.2 (m 及 0.45 (m之親水性醋酸纖維濾膜。 3.2.29.試藥：碘、碘化鉀、磷酸氫二鈉（Na2HPO4）、次氯酸鈉（sodium hypochlorite）、氫氧化鈉、葡萄糖（glucose）、葡萄糖（dextrose）、鹽酸、95%乙醇、無水乙醇、氯化鈉、無水磷酸氫二鈉（Na2HPO4, anhydrous）、磷酸二氫鉀、硫甘醇鈉（sodium thioglycollate）、結晶紫（crystal violet）、草酸銨（ammonium oxalate）及沙黃O（safranin O）均採用化學試藥級；明膠（gelatin）、胰蛋白酶、牛心（beef heart）、 蛋白腖（proteose peptone）、胰化酪蛋白（trypticase）、蛋白腖（peptone）、酵母抽出物（yeast extract）及洋菜（agar）