胡萝卜素含量的测定11.pptVIP

高效液相色谱法测定 β—胡萝卜素含量 一、实验目的 二、实验原理 三、实验仪器材料 四、实验操作步骤 五、实验结果 六、实验思考题 1、实验目的 2、实验原理 3、. 实验仪器和材料 4、实验操作步骤： 色谱条件 色谱柱：C18柱； 流动相：甲醇； 流速：1.5ml/min； 紫外检测波长：440nm； 进样量：20微升。 样品进样前需要用0.45微米的滤膜过滤，装入进样瓶中。 5、实验结果和计算 HPLC外标法定量 式中 m：10g(mL)样品中β-胡萝卜素含量（mg）； m1：标样进样体积中β-胡萝卜素含量（mg）； m2：样品称样质量（g或mL）； A1：标样峰面积值； A2：样品峰面积； V1：样品进样质量（μL）； V2：样品定容体积（mL）。 实验注意事项 1、样品的预处理； 2、流动相的过滤脱气处理； 3、色谱条件的选择。 思考题： 1、高效液相色谱仪的组成与工作主要流程？ 2、高效液相色谱的特点？ 3、进行高效液相色谱仪检测β-胡萝卜素时要对待测样品进行哪些预处理？ 4、色谱图中β-胡萝卜素吸收峰峰高、峰面积与样品中β-胡萝卜素浓度和纯度有何关系？ * * 实验指导 1、理解高效液相色谱法的目的和意义； 2、理解和掌握高效液相色谱法的原理和方法； 3、掌握高效液相色谱仪的操作。 高效液相色谱仪的组成与工作主要流程如下图所示： β-胡萝卜素含量测定原理 β-胡萝卜素为脂溶性维生素A的前体，存在于各种动植物体内，可以直接用有机溶剂提取后进行检测，然后利用反相色谱法分析。 仪器： 高效液相色谱仪 紫外检测器等。 试剂材料：β-胡萝卜素； 乙酸乙酯； 正己烷； 色谱甲醇； 新鲜胡萝卜。 （1）标准溶液的配制：精确称取100mg的含量为30%的β-胡萝卜素标准品用乙酸乙酯溶解定容到100mL的棕色容量瓶中。进样时取1ml，稀释定容到100ml。 （2）样品的制备：取样品，捣碎成浆状，称取10g，加甲醇、正己烷各10ml研磨。过滤后，滤液以及用乙酸乙酯洗涤渣的滤液一并接收在三角瓶中，提取液放入100ml棕色容量瓶中，乙酸乙酯定容到100ml。 * * * * *