生物化学与分子生物学大实验 serial experiments of biochemistry .docVIP

生物化学与分子生物学大实验 Serial Experiments of Biochemistry and Molecular Biology 一、课程基本信息 学 时：（75） 学 分：（2.5） 考核方式：（考查，平时成绩占总成绩的30%） 中文简介：生物化学与分子生物学大实验是生物科学研究中的一门重要的实验技术方法，是生物类本科专业学生必备的基本实验技术之一。在我院生物技术专业的教学计划中，生物化学与分子生物学大实验是继植物学、有机化学、植物生理学、生物化学、遗传学等课程之后开设的第一门大实验类必修课。第四学期开设。包括对酶、蛋白质、黄酮等化学物质的提取、含量和性质的测定；以及工程菌的活化、摇瓶与生长曲线的分析及测定。学习采用回流、分光光度法和PAGE等技术进行分析。 二、教学目的与要求 本课程属于实验操作技术课，主要是使学生了解生物化学与分子生物学基本实验技术的原理与方法，掌握基本计算方法、药品配置方法、操作方法和几类生化物质的基本特性，熟悉大实验的基本操作流程，为后续的生物技术大实验、细胞工程大实验、动物生物制品大实验打下基础。 三、教学方法与手段 教学主要采用示范和实际操作指导的方法等。在讲解原理时也用到多媒体演示的方法。 四、教学内容及目标(标题黑体,小四；表格控制格式，打印不会显示) 教学内容 教学目标 学时 分配 实验一 溶菌酶的提纯结晶 6 目的与要求 1.　鸡蛋清内含有丰富的溶菌酶，向蛋清中加入一定量的中性盐，并调节pH值至溶菌酶的等电点，溶菌酶即可结晶析出。如结晶不纯，可重结晶。 2.　要求学生掌握布氏漏斗的使用，显微镜观察记录晶形技术。 实验二 酪蛋白的提取及含量测定 12 目的与要求 1.　学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法；加深理解等电点的基本概念及在生产实践中的应用。 重点与难点: (1)为什么酪蛋白可在等电点pH下沉淀出来?(2)蛋白质为什么可以用有机溶剂沉淀? 目的与要求 2.　要求学生掌握双缩脲法测定蛋白质含量的原理和方法；了解标准曲线的制作方法及其在物质定量测定中的应用。 重点与难点: (1)如何选择未知样品的用量?(2)对于作为标准的蛋白质应有何要求? 实验三 酪蛋白SDS垂直板电泳 12 目的与要求 1.　掌握垂直板型聚丙烯酰胺凝胶电泳技术。 2.　要求学生掌握SDS测定蛋白质分子质量的原理和方法。 重点与难点: (1)如果所得到的SDS电泳图谱只有一条带，是否可以说该样品肯定是纯的?(2)SDS和分子筛层析都可以用于测定蛋白质分子质量，其差异何在？ 实验四 酪蛋白性质的测定 12 目的与要求 1.　通过实验加深对胶体分子稳定因素的认识。 2.　要求学生掌握蛋白质盐析、透析、颜色反应和热变性原理与方法 重点与难点: 蛋白质盐析：高浓度的中性盐对蛋白质溶解度有何影响?为什么? 蛋白质透析：为什么盐析沉淀的蛋白质可以通过透析而脱盐? 蛋白质颜色反应：(1)是否所有的氨基酸都呈现黄色反应的阳性结果?为什么?是否大部分蛋白质呈现阳性结果?为什么? (2)米隆反应的原因是什么? 蛋白质热变性：加热为何使蛋白质凝固? 实验五 菠萝蛋白酶活性的测定 9 目的与要求 1. 了解酶活力单位的定义。 2. 掌握果实菠萝蛋白酶的活力测定的实验操作。 重点与难点：酶活性的定义 实验六 植物总黄酮的提取与测定 12 目的与要求 1.　掌握植物体内总黄酮的提取和用紫外分光光度法进行总黄酮含量的测定方法。 2.　要求学生掌握回流的装置与使用方法。 重点与难点: (1)黄酮类化合物属植物体内天然色素，有哪些生理活性? (2)黄酮类化合物种类很多，你能说出哪些？ 实验七 菌种的培养与保存 15 目的与要求 1. 了解平板划线分离纯种的原理，并熟练掌握该操作法 2. 了解细菌生长曲线特点及测定原理； 3. 学习用比浊法测定细菌的生长曲线； 4. 掌握菌种长期保存需要的培养基及温度条件。 重点与难点: (1) 检查每个平板划线分离的结果，并绘制菌苔、菌落分布草图。(2) 将测定的OD值填表，绘制大肠杆菌及酿酒酵母的生长曲线。 实验 序号 实 验 项 目 名 称 实验 时数 每组 人数 主 要 使 用 仪 器 材料 实验