水稻转基因系CX8621中Xa21的整合和表达解读.PDFVIP

生 物 工 程 学 报 高利芬 等/水稻转基因系 CX8621 中Xa21 的整合和表达 1255 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn September 25, 2016, 32(9): 1255−1263 DOI: 10.13345/j.cjb.150549 ©2016 Chin J Biotech, All rights reserved 农业生物技术 CX8621 Xa21 1,2* 1* 1 1 3 1 3 1 高利芬 ，刘鹏程 ，夏志辉 ，赵纪莹 ，史佳楠 ，江光怀 ，刘国振 ，翟文学 1 100101 2 430056 3 071001 , , , . CX8621 Xa21 . , 2016, 32(9): 1255–1263. Gao LF, Liu PC, Xia ZH, et al. Integration and expression of Xa21 in transgenic rice CX8621. Chin J Biotech, 2016, 32(9): 1255–1263. 摘 要: 农杆菌介导的转基因技术在植物中已被广泛应用，而目的基因能否发挥功能受到多种因素的影响。 前期，通过农杆菌介导的转化，实验室创制了无选择标记、无载体骨架残留的水稻转Xa21 基因系 CX8621 。 截止目前，CX8621 已稳定遗传 16 代，依然保持着对水稻白叶枯病的优良抗性。在此基础上，本研究对外源 基因Xa21 在CX8621 中的整合和表达情况进行了分析。首先，通过在转化载体pBXa21 的左右边界与Xa21 基 因序列设计嵌套引物，确定Xa21 被完整地整合到CX8621 中。随后，利用改良的Tail-PCR 方法体外克隆了整 合位点的边界序列，明确了Xa21 被整合在CX8621 的2 号染色体上。然后，通过RT-PCR 分析了Xa21 在CX8621 中不同时期和不同组织的表达情况，结果表明Xa21 在 CX8621 中能稳定表达，其表达量的变化与之前报道的 抗病性反应吻合。此外，还制备了天然XA21 蛋白的抗体，对CX8621 不同时期、不同组织中XA21 蛋白的表 达量进行了检测，结果发现在种子中检测不到XA21 蛋白。由此，通过对外源基因Xa21 的整合和表达分析， 为CX8621 的转基因生物安全评价提供了部分科学依据。 : 转基因水稻，Xa21 ，抗白叶枯病，T-DNA 整合，表达分析 Received: December 24, 2015; Accepted: January 28, 2016 Supported by: National Transgenic Major Program of China (No. 2014ZX08001-002), National Natural Science Foundation of China (No., Internal Grant of Jianhan University (No. 3003. Corresponding author: Wenxue Zhai. Tel: +86-10 E-mail: wxzhai@ * These authors contributed equally to this study. (No. 2014ZX08001-002) (No. (No. 3003 间：2016-03-01 网络出版地址：/kcms/detail/1