以草甘膦为筛选标记的大豆转基因体系的建立及抗除草剂转基因大豆.PDF

中国科学: 生命科学 2014 年 第44 卷 第4 期: 406 ~ 415 SCIENTIA SINICA Vitae SCIENCE CHINA PRESS 论 文 中国知名大学及研究院所专栏 浙江大学专辑 以草甘膦为筛选标记的大豆转基因体系的建立及 抗除草剂转基因大豆的培育 ① ① ① ① ① ① ② ①* 陆玲鸿 , 韩强 , 李林 , 周练 , 刘瑞芳 , 宋张悦 , 沈志成 , 寿惠霞 ① 浙江大学生命科学学院, 植物生理学与生物化学国家重点实验室, 杭州 310058; ② 浙江大学农业与生物技术学院昆虫科学研究所, 杭州 310058 * 联系人, E-mail: huixia@ 收稿日期: 2014-02-10; 接受日期: 2014-03-13 转基因生物新品种培育科技重大专项(批准号: 2013 ZX08004-001, 2014ZX08004-01B)资助 doi: 10.1360/052014-47 摘要 抗草甘膦转基因大豆能显著提高大豆生产效率, 具有重大的应用前景. 本实验室前期研 关键词 究建立了农杆菌介导、草胺膦为筛选剂的大豆转基因体系, 转化效率在4% 以上. 在此基础上, 利 大豆 转基因 用G6-EPSPS 和G10-EPSPS 2 个具有自主知识产权的草甘膦抗性基因, 通过优化转化体系, 成功 草甘膦 建立了以草甘膦为筛选剂的大豆遗传转化体系, 转化效率达1%以上. 浓度梯度实验发现, 当草甘 分子鉴定 膦的筛选浓度为 100 mg/L 时, 虽然丛生芽的再生率下降了50%~60%, 但最终转化效率不受影响. 进一步通过基因表达分析、Western blot 、Southern blot 和除草剂抗性鉴定等方法对转基因大豆进 行了分子检测和验证, 最后获得了分子特征明确、对草甘膦抗性稳定的抗草甘膦转基因大豆后代. 结果对国内抗草甘膦转基因大豆转基因方法研究及抗除草剂新品种选育具有意义. 势[3,4] [5,6] 大豆(Glycine max L.)是重要的粮食和油料作物, , 是大豆转基因的主要手段 . 与其他物种相 也是人类主要的食用蛋白和工业原料来源, 在我国 比, 大豆是一种再生困难的作物, 转基因效率普遍较 国民经济发展中具有重要地位. 自 1996 年美国孟山 低. 研究表明, 农杆菌与植物细胞间的相互作用是影 都公司研制的抗草甘膦转基因大豆被批准商业化以 响大豆转基因效率的关键因素[7~9], 而受体基因型、 来, 全球转基因大豆种植面积逐年上升, 已占大豆总 外植体活力、农杆菌菌株、载体、筛选系统(包括筛 面积的 81%[1]. 中国曾经是世界上最大的大豆出口国, 选剂类型以及筛选压力) 、激素配比、抗氧化剂、温 由于生产效率低下, 种植面积和产量逐年下降, 现进 度、光等因素, 也会影响大豆转化效率[10]. 口大豆总量占全国消费量的 80%. 建立我国自主的