噬菌体肽库技术筛选抗PRRSV肽及其应用.pdfVIP

畜牧与饲料科学 AnimalHusbandryandFeedScience 2012 ， 33(3)：23—25 噬菌体肽库技术筛选抗PRRSV肽及其应用 侯凤香 ，刘 珂 ，李培德 ，涂宜强 。。陈溥言z，涂国众 · (1．温州科技职业学 院动物科学系 ，浙江 温州 325006；2．南京农业大学动物医学院，江苏 南京 210095) 摘要：噬茵体展示肽库是一种被广泛用于抗原表位鉴定，结合蛋 白筛选的技 术。该试验利用噬茵体展示技术筛选与猪 呼吸与繁殖障碍综合征病毒 (PRRSV)ORF1B复制酶蛋白相互作用的蛋 白，并进一步验证筛选蛋白的抗病毒作用。以表 达纯化的PRRSVORF1B蛋 白CTD包被 高亲和性 96孔板作为靶蛋 白，应用T7噬茵体展 示技术对随机 12肽库 cDNA 文库进行 筛选，并分析测序筛选的克隆。将筛选出的克隆序列合成后 ，在体外验证合成多肽的抗PRRSV效果 结果表 明，在4轮的噬茵体筛选后，共得到 87个阳性克隆，经测序鉴定出l1个筛选的 12肽 ，并通过体外抗病毒试验得到P10 是一个具有高抗病毒活性的 12肽。试验结果为PRRSV的抗病毒研究奠定了基础 关键词 ：噬菌体展示肽库 ；猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒 ：抗病毒 中圈分类号 ：$852．65 文献标识码 ：A 文章顺序编号 ：1672—5190(2012)03—0023—03 ScreeningOfAnti—PRRSV PeptidebyPhagePeptideLibraryandItsApplication HOUFeng-xiang，LIUKd,LIPei-de，TUYi—qiang，CHENFu-yan2,TUGuo—zhong ‘ (1．DepartmentofAnimalScience，WenzhouVocationalCollegeofScienceandTechnology。Wenzhou 325006．China；2．C011egeof VeterinaryMedicine，NanjingAgriculturalUniversity，Nanjing 210095，China) Abstract：Thephagedisplaypeptidelibraryisawidely-usedepitopeidentificationtechnology whichiscombinedwiththeprotein ， screening．Phage displaytechniquewasused to screen outtheproteinsinteractedwith ORF1B copyenzymeprotein ofporcine respiratory andreproductivesyndromevirus (PRRSV)．Andtheantiviralactivityofthescreeningproteinwasfurtherverified．The purifiedCTDproteinofPRRSVORF1Bthatcoatedhigh—affinity96Tboardwasusedasthetargetprotein．T7phagedisplaytechnoloyg wasappliedtoscreenoutthecDNAlibrary ofrandom 12一peptidelibrary．Andthescreenedclonesweresequencedandanalyzed．After thesynthesisofthescreenedclonesequence，theanti-PRRSV effectofthesyntheticpolypeptidewasverifiedinvitro．Th eresults showed htat87positivecloneswereobtained after4 circlesofphag