Egr-1启动子放射诱导调控Bax基因表达的研究.pdfVIP

天津医科大学硕士研究生 Egr．1启动子放射诱导调控Bax基因表达的研究 中文摘要 当细胞受到辐射时，某些编码转录冈子的短暂早期基因被激活。这些被激活的基因 包括早期生长反应因子基因家族。这些基因可感受X射线产生的氧自由基的诱导而引起 细胞的反应。以前的研究证明Egr-l被辐射诱导是由Eg-1启动子区所含的6个CC(A+T rich)。GG(CArG)模体介导。我们可以利用这个放射诱导启动子来控制肿瘤组织肉的Bax 的表达。 在Bcl-2家族中，Bax是促凋亡蛋白。B“阱无活性状态存在于细胞浆内。在被不 同刺激诱导后，B“的构象发生改变并转移到线粒体上。在线粒体膜上，它形成低聚物 并使线粒体膜形成孔，使细胞色素c和其它细胞毒性因子可以排出。因此，Bax的活性 调控就成为细胞是否死亡的关键因素。在Bax与其它Bcl．2成员之间的反应成为了此调 控的关键。当Bcl．2过表达时，B“与Bcl．2形成异源二聚体，细胞继续生存。当Bax 过表达时，B“本身形成同源二聚体，细胞凋亡。 我构建一个由Egr—l启动子上游连接B“eDNA的质粒，它可以在受到辐射居被激 活而引起Bax表达，从而提高放射诱导凋亡。 第一部分 a E2r．1启动子和BaxeDNA的制备 为了构建放射诱导基因表达系统，我从BALB／c小鼠的基因组中提取Eg-1启动子 的基因序列。通过RT-PCR，我从乳腺癌细胞中提取Baxa基因序列。 第二部分 pEgr．Bax表达载体的构建和鉴定 为了研究放射诱导Ba)【基因表达的可能性，我构建了一个pE妒-Bax表达裁体。当 它受到辐射时可提高Bax基因的表达。我从plRES．EGFP质粒中剔除CMV，代之为Egr-l 启动子。然后将Bax eDNA连接到plRES．EGFP质粒的多克隆位点上。通过PCR测定 Eft-1启动子和BaxeDNA的序列长度分别为476bp和593bp。通过铡序证明碱基序列 正确。这个载体构建成功可以为肿瘤治疗提供一种方法。 Bax 【关键词】Egr_l启动子 放射治疗 凋亡 基因治疗 表达载体 天津医科大学硕士研究生 A on Bax Radiation-induciblePromoter by StudyregulatingExpression Egr-1 Abstraet The to is cellar radiationassociatedwith activationof exposureionizing transcriptional certainimmediate thatencode factors．Theseincludemembers early genes transcription genes ofthe growth families．Theinductionofthese early responsegene genesfollowing X-irradiation cellular tooxidative studies may stress．Previoushave