FGF2对破骨细胞体外分化以及骨吸收功能的直接 - 第三军医大学学报.DOC

编号 201306074 刊用形式 论著 FGF2对破骨细胞体外分化以及骨吸收功能的直接调控作用 李晓刚，苏 楠，唐玉彬，温 轩，唐浚洲，陈思宇，李 灿，杜晓兰，陈 林 (400042重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室，骨代谢与修复中心，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室) [摘要] 目的 研究成纤维细胞生长因子2（Fibroblast growth factor 2，FGF2）对于破骨细胞（osteoclast，OC）体外分化与功能的直接调控作用。方法 分离野生型C3H/HeJ小鼠骨髓单核细胞，利用RANKL（receptor activator of NF-kB ligand，RANKL）以及M-CSF（macrophage colony stimulating factor，M-CSF）诱导向破骨细胞分化，同时在实验组中加入FGF2，观察骨髓单核细胞向破骨细胞分化发育过程，鬼笔环肽（Phalloidine）染色观察破骨细胞肌动蛋白环（actin ring）变化，Real-time PCR检测破骨细胞Trap（tartrate resistant acid phosphatase）、Mmp9（matrix metalloproteinase-9）、Ctsk（cathepsin K）以及Clcn7（chloride channel 7）表达，破骨细胞与骨片共培养检测骨吸收功能变化，并用Western blot检测相关信号通路分子表达情况；结果 ①TRAP染色显示实验组与对照组破骨细胞数量无明显差异（P0.05）；②鬼笔环肽染色提示实验组与对照组肌动蛋白环均正常；③实验组Trap，Mmp9及Ctsk mRNA表达量均高于对照组（P0.05），而Clcn7 mRNA无明显差异；④体外骨片吸收实验提示实验组骨吸收陷窝面积显著大于对照组（P0.05）；⑤Western blot检测实验组磷酸化细胞外信号调节激酶extracellular signal-regulated kinases，ERK）较对照组表达明显增多。结论 FGF2不影响破骨细胞前体细胞向破骨细胞的分化以及肌动蛋白环的形成，但可以通过ERK信号通路正向调控成熟破骨细胞的骨吸收功能。 [关键词]破骨细胞；成纤维细胞生长因子2；细胞外信号调节激酶 [中图法分类号]R322.71；R329.28；R394.2 [文献标志码]A [通讯作者]：陈林，E-mail：linchen70@163.com [作者单位]：400042 重庆，第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室，骨代谢与修复中心，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室 [基金项目]：国家重大科学计划（973）(No. 2014CB942904)，国家自然科学基金项目 (No.No.，国家重点实验室自主研究课题（SKLZZ201017） Fibroblast growth factor 2 directly regulates osteoclast differentiation and bone resorption function Li Xiaogang, Su Nan, Tang Yubin, Wen Xuan, Tang Junzhou, Chen Siyu, Li Can, Du Xiaolan, Chen Lin (State Key Laboratory of Trauma, Burns and Combined Injury, Center of Bone Metabolism and Repair, Institute of Surgery Research, Daping Hospital, Third Military Medical University, Chongqing, 400042, China) [Abstract] Objective To determine the effect of fibroblast growth factor 2 (FGF2) on the differentiation of bone marrow monocytes (BMMCs) to osteoclast and bone resorption function. Methods After BMMCs were isolated from the bone marrow of femurs and tibiae from C3H mice, the cells were treated with receptor activator of nuclear f