淡水涡虫细胞分散方法研究及干细胞表达基因pumilio的克隆与分析.pdfVIP

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2017-07-17 发布于上海
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淡水涡虫细胞分散方法研究及干细胞表达基因pumilio的克隆与分析.pdf

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淡水涡虫细胞分散方法研究及干细胞表达基因pumilio的克隆与分析

摘要研究的基础。本文以日本三角涡虫(Dugesia 响分散效果的消化温度、胰酶浓度、离心速度进行了比较。结果表明：用0．25％的胰酶 min，然后以4℃、1000 rain，收集 (pH=7．4)，20。C消化成体涡虫组织15 rpm离心3 沉淀，重悬后显微镜检查显示在该条件下得到的悬液中细胞形态完整，组织碎片少，是制备涡虫细胞悬液的首选方法。 RACE方法成功克隆出P 析表明：P．yangchengensispumilio基因全长约2048bp，根据Kozak规则确定其开放阅 frame，ORF)长度为1803 读框(openreading bp，编码约600个氨基酸，分子量约为66．2 kD，等电点约为7．4，5、非编码区(5、UTR)长约92 homology bp。PUM同源域(Pumilio 较，P 70．9％591 CIonDrchissinensis和Schistosomamansoni构成一个进化上的单系，表明它们有较近的亲缘关系。总之，该研究建立的涡虫体细胞的分散方法及克隆的neoblasts特异性表达基因 pumilio为下一步涡虫neoblasts筛选及生物学研究奠定了基础。关键词：涡虫，细胞分散，基因克隆，pumilio，干细胞 ABSTRACT for and mechanism，asthey Planadansarefamousmodelanimals longevity studyingregeneration cells and risetoother abletoself-renew of adultstemcells give neoblasts，a pluripotent possess population baseto the and oftheneoblastsisthe study ortissuesinasexual locating planarians．Isolating，marking of stemcells characteristics biological planarian methodfor To the cell．dissociated key get optimal planarian，three testedin and DugesiajaponicaPolycelis andcentrifugationspeed-were planarian temperature in