滑膜细胞微环境对软骨细胞生物学活性的影响.pdfVIP

中文摘要 关节病。它是一种以软骨退行性变为核心，累及骨质，包括滑膜，关节囊及关 节囊外其他结构的不同程度的炎性病变。随着我国人口老龄化和OA发病趋势 年轻化，OA逐渐成为危害人类健康和生存质量的重要疾病。对OA发生和发 展机制的研究也已成为骨科领域研究的重点。研究显示无论何种原因引发的OA 多伴有关节内微环境失衡，滑膜及其细胞是其主要因素。 目的： 建立滑膜细胞与软骨细胞共培养体系，构筑类OA微环境，探讨滑膜细胞 在OA发生中的作用，为OA发病机理研究提供依据。 方法： 1采用改良的Hulth法复制兔膝关节骨性关节炎模型，切除内侧半月板，切断内 侧副韧带及前交叉韧带，术后4周关节肿胀、滑膜增生明显，获得大量滑膜组 织。 2用胰蛋白酶．II型胶原酶联合酶消化法分离滑膜细胞进行原代与传代培养，观 察滑膜细胞形态、活性，进行CD68免疫组化鉴定。 3采用两步酶消化法从正常兔膝关节软骨组织获取软骨细胞，进行原代、传代 培养及细胞学观察； 4建立滑膜细胞与软骨细胞共培养体系，将原代和传代滑膜细胞分别以不同的 培养，以正常软骨细胞组为对照组，观察原代及传代滑膜细胞微环境对软骨细 胞形态及生物学活性的影响。 chainreaction， 5采用逆转录聚合酶链式反应(reversetranscriptasepolymerase RT_—PCR)方法检测共培养10天和20天时原代及传代滑膜细胞微环境对各组软 骨细胞在RNA水平上，II型胶原及蛋白多糖基因表达的影响。 结果： 1改良Hulth法复制膝骨性关节炎模型，造模4周关节肿胀，滑膜组织增生明 显，衬覆滑膜细胞层数增加，间质纤维组织增生，软骨表面裂隙或纤维化，软 骨细胞呈小灶性坏死。 2胰蛋白酶．II型胶原酶联合酶消化法可培养获得大量滑膜细胞且细胞活性大 于98％，巨噬细胞样滑膜细胞CD68免疫组化染色阳性。 3胰蛋白酶．I型胶原酶一II型胶原酶联合酶消化法可成功分离并获得大量高活 性软骨细胞。 4以滑膜细胞与软骨细胞共培养体系构筑了滑膜细胞微环境，滑膜细胞数量、 培养时间与软骨细胞形态及增殖活性密切相关，滑膜细胞数量越多、作用时间 越长，软骨细胞增殖活性越低。 5滑膜细胞与软骨细胞共培养体系中，滑膜细胞数量、代次与II型胶原及蛋白 多糖基因表达密切相关。共培养的软骨细胞基因表达明显下调，原代滑膜细胞 作用强于传代滑膜细胞；滑膜细胞数量越高，软骨细胞基因表达越低。 结论： 1．改良Hulth造模法可迅速形成骨性关节炎，使滑膜组织在短时间内增生明显， 衬覆滑膜细胞层数增加，间质纤维组织增生，获得大量的滑膜组织，解决了滑 膜取材难的问题。该法适用于提取滑膜组织和OA发病机制的研究。 2．联合酶消化法可分离获取滑膜细胞、软骨细胞，实验操作简单、快捷，细胞 贴壁快且细胞活性率较高，可在短时间内为实验研究提供大量目标细胞，为实 验的进一步研究提供了方便。 3．构筑的滑膜细胞与软骨细胞共培养体系适用于OA微环境的研究，且该体系可 模拟类OA关节内环境，适用于研究软骨损伤的进程。 -． 4．滑膜及滑膜细胞的结构和功能与关节内微环境的平衡密切相关，这种微环境 的失衡可导致软骨细胞结构和功能学活性的改变，可为OA发病的重要因素之一。 关键词：骨性关节炎滑膜细胞软骨细胞共培养微环境 lI Abstract achromc diseaseof and Osteoarthritis(OA)isprogressive bone which joint occursin isa tothe usually middle-aged．It cartilagedegenerativechangescore，