定量分析方法与验证.ppt

第四章 药物定量分析与 分析方法验证 第一节 定量分析样品的前处理方法 第一节 定量分析样品的前处理方法 一、含卤素有机药物的分析 银量法 (4) 装置 (6) 吸收液 第三节 药品分析方法的验证 （二）体内药物分析的意义 （三）体内药物分析的特点 1．干扰物质多：生物样品中含有大量的内源性物质，如蛋白质、脂肪等，以及代谢物、结合物等，样品一般均需经过分离、净化后才能进行分析。 2．样品量少、不能重复取样：生物样品多数在特定条件下采集，无法再次取样，且样品量少。 3．被测成分浓度低：对分析方法的灵敏度及专属性要求较高。在测定前需浓缩、富集以适应分析方法要求。 4．药物浓度监测和药物滥用：要求分析方法简便、快速 液-液萃取中需注意的问题： ① 适当的有机溶剂：常用乙醚、氯仿等。 ② 适当的水相pH值：由药物的pKa值确定，一般碱性药物在碱性条件、酸性药物在酸性条件下萃取。 碱性药物最佳pH 高于pKa值1-2个pH单位 酸性药物最佳pH 低于pKa值1-2个pH单位 中性药物： pH=7 附近 ③ 离子型药物：离子对萃取 ④ 提取技术：提取次数尽可能少，不要求提取完全，而要求适量而稳定的提取率。 （2）液-固萃取（LSE）： 将生物样品溶液通过填有适宜担体的小柱，使药物保留在担体上，洗去杂质后，用适当的溶剂洗脱下来测定；或杂质保留在担体上，先把药物洗脱下来测定。 担体 亲水性：硅藻土 疏水性：活性炭、聚苯乙烯或C18化学键合硅胶 常用微型柱：Bound Elut 、Sep-pak UV、HPLC 回收率要求在98～102%范围 容量分析法 回收率要求在99.7～100.3%范围 中药分析 回收率一般要求在95～105%范围内，有些方法操作步骤繁多时，可要求在90～110%范围内。RSD一般在3%以内。 数据要求 规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品各测三次。 （二）精密度(Precision) 定义：系指在规定的测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之接近的程度。常用 标准差（SD）或相对标准差（RSD）表示。 在相同条件下，由同一个分析人员测定所得结果的精密度。 在规定的范围内，至少用9次测定结果评价，如制备三个不同浓度样品，各测三次。 或把被测物浓度当作100%，至少测6次计算RSD进行评价。 1. 重复性 同一实验室，不同时间由不同分析人员用不同设备所得结果的精密度。 考察随机变动因素的影响。变动因素为不同日期、不同分析人员、不同设备。 2. 中间精密度 不同实验室，不同分析人员测定结果的精密度。 当分析方法将被法定标准采用时，应进行重现性试验。 3. 重现性 指有其他成分（杂质、降解物、辅料等）可能存在情况下采用的方法能准确测定出被测物的特性，能反映该方法在有共存物时对供试物准确而专属的测定能力。是指该法用于复杂样品分析时相互干扰程度的度量。 （三）专属性（specificity） 氧氟沙星乳膏的含量测定图谱 乳膏基质 样品 （四）检测限(limit of detection，LOD) 1、定义： 系指试样中被测物能被检测出的最低量。无需定量测定。常用%、ppm、ppb表示。 它既反映方法与仪器的灵敏度和噪音的大小，也表明样品经处理后空白(本底)值的高低。 2、方法： 信噪比法（仪器分析方法）： HPLC、GC ：用已知浓度样品与空白试验对照，记录测得的被测药物信号强度S与噪音(或背景信号)强度N，以能达到S／N＝2或S／N＝3时的样品最低药浓为LOD； UV或荧光分析：多次空白试验，求得其背景响应的标准差，将三倍空白标准差(即3δ空或3S空)作为检测限的估计 目视法（非仪器分析方法）：通过已知浓度的样品，目视确定能被可靠地检测出的最低量作为检测限。 （五）定量限 (limit of quantitation，LOQ) 1、定义： 指在具有一定准确度和精密度的前提下，样品中被测物能被定量测定的最低浓度或量。常用%、ppm、ppb表示 杂质和降解产物定量测定时需确定定量限。 定量限与检测限的差别：定量限要定量测定某一药物在样品介质中的最低浓度，且定量限规定的最低浓度应该符合一定的精密度和准确度的要求。 2、方法： 非仪器分析方法：与检测限的确定方法相同； 仪器分析方法：S / N=10时相应的浓度，作为定量限的估计值。 （六）线性与范围 (lineari