江良択実熊本大学発生医学研究所教授.PDFVIP

「人工多能性幹細胞（iPS 細胞）作製・制御等の医療基盤技術」 H22 年度 平成２１年度採択研究代表者 実績報告 江良 択実 熊本大学 発生医学研究所 教授 iPS 細胞を用いた組織幹細胞誘導の確立と分子基盤の解明 §１．研究実施の概要 本研究では、ES/iPS 細胞から中間段階細胞を明らかにしながら、間葉系幹細胞を中心に組織 幹細胞の分化誘導条件を確立し、その分化の分子機構を明らかににすることがねらいである。22 年度は、マウスES 細胞を分化誘導して得られる中間段階細胞分画をFACS にて純化した後、い くつかの増殖因子を用いて培養し、間葉系細胞をこの分画から誘導することに成功した。またヒト iPS 細胞をシングル細胞で維持培養、さらにシングル細胞で単層培養による分化誘導が行えるシ ステムを確立した。さらに間葉系幹細胞で働く分子として、ES 細胞の分化系から新たに、DNA 結 合ドメインを持つ転写因子と考えられる機能不明分子を単離した。この分子は、これまでに間葉系 細胞の増殖を負に制御して働くことを明らかにした。一方、分化経路を明らかにするには、細胞の 起源の解明が必須である。そこで、間葉系幹細胞の起源と幹細胞特異的に分子の機能を解析す るために、間葉系幹細胞のマーカー遺伝子に Cre リコンビネースを組み込んだコンストラクトを作 製し、現在ノックイン ES 細胞を樹立中である。さらに、どの中胚葉分画が間葉系幹細胞の起源で あるかを調べるためにマーカー遺伝子へのCre リコンビナーゼを挿入したノックインコンストラクトを 作製し、マウスES 細胞に導入中である。 一方、血液細胞分化の研究では、ES 細胞から分化誘導した血液細胞集団を放射線照射マウ スに移植し、T リンパ球系列と骨髄球系列の長期にわたるドナーの寄与を認めた。このうち一部に ついては、二次移植が可能であった。 腎前駆細胞分化研究では、中間中胚葉で発現する転写因子の遺伝子座に蛍光蛋白 GFP を 挿入したES 細胞を樹立し、中間中胚葉の誘導条件を検討した。さらにES 細胞から作製したマウ スの中間中胚葉を採取し、遺伝子発現及び機能を調べた。 また、iPS 細胞の核構造解析では、核構造体やクロマチン因子を認識する多数の特異抗体を 用いて解析し、いくつかの点でiPS 細胞を特徴づける結果を得た。さらに、高次エピゲノム解析に おいて、クロマチン境界を形成するインスレーター結合因子の集積ゲノム部位のChIP-Chip 解析 1 を進めている。 §２．研究実施体制 （１）「江良」グループ ①研究分担グループ長：江良 択実（熊本大学、教授） ②研究項目 ・ ES/iPS 細胞から中間段階細胞（神経上皮・中胚葉）への分化誘導方法の開発 ・ 中間段階細胞から間葉系幹細胞、造血幹細胞への分化誘導方法の開発 ・ 間葉系幹細胞、造血幹細胞の分化経路の解明 ・ 間葉系幹細胞、造血幹細胞分化の分子機構の解析とエピゲノム解析 （２）「西中村」グループ ①研究分担グループ長：西中村 隆一（熊本大学、教授） ②研究項目 ・ ES/iPS 細胞から中間中胚葉系細胞への分化誘導方法の開発 ・ 中間中胚葉系細胞から腎前駆細胞への分化誘導方法の開発 ・ 腎前駆細胞分化の分子機構の解析とエピゲノム解析 （３）「中尾」グループ ①研究分担グループ長：中尾 光善（熊本大学、教授） ②研究項目 ・ iPS 細胞とその分化誘導における高次エピゲノムの解析 ・ iPS 細胞とその分化誘導における細胞核構造の解析 §３．研究実施内容 江良グループ 間葉系幹細胞の中胚葉を経由する分化経路解析では、マウスES 細胞の分化系でPDGFR と VEGFR2 (ヒトでは KDR) といった２つの表面マーカーを組み合わせて用いることで、中胚葉 系細胞の分離に成功している。21 年度に誘導条件を確立した。その成果を基に22 年度は、中胚 葉系細胞分画を FACS にて分離し、間葉系細胞への分化誘導方法を確立した