芽孢杆菌A-47鞭毛蛋白基因的克隆及其与定殖相关性初探.pdfVIP

摘要 植物内生细菌是指能定殖在健康植物组织内。并与奇主植物建立和谐联合关系的一 类微生物。诸多研究结果表明．部分植物内生细菌对植物是有益的，因此，这部分植物 内生细菌的研究己成为国内外研究的热点之一。 蜡样芽孢杆菌(bacillusceleus)A．47是本实验室从小麦根部分离的一株内生增产 细菌。它可以在小麦的根部定殖，但其定殖机理目前尚不清楚，本研究从该菌的鞭毛蛋 白基因入手，先克隆基因，然后采用插入突变方法获得突变菌株，再比较突变株与野生 菌株之间的性状差异，为明确细菌的定殖冈子做一些初步探索。 由鞭毛蛋向基因的同源序列设计引物，以蜡样芽孢杆菌A．47的基因组DNA为模 板，扩增获得了两个鞭毛蛋白基因，分别命名为flaA和加B；选取flaA基因中780bp 的片段，连接到自杀载体pHSG299上，电击转化A-47，利用同源重组原理，获得了一 个鞭毛蛋白基因插入突变体，电镜观察发现突变体不能再产生鞭毛；用突变体和双抗标 记的A．47(野生型)以浸种法分别接种小麦，14天后取6株小麦的根部，分别测定野 生氆菌株和突变体在小麦根部表面的定殖量，测定结果分别为8．2和7．4(Logloofcfu／g 根鲜重)；同时取12株小麦分别测定野生型菌株和突变体在小麦根内的定殖量，测定结 果分别是6．1和5．0(Logloofcfu／g根鲜重)：研究结果还突变体在根内部的定殖量可能 随根部表面定殖量的F降而减少．但本试验还只是得到了一些初步结果，至丁鞭毛是否 在内生定殖阶段发挥多_人作用尚不明确，要彻底解析鞭毛与定殖的关系，还需要人餐∞ 后续一作。 关键词：植物内生细菌，鞭毛蛋白，基因克隆，插入突变，定殖相关性 Abstract bacteriaare tothekindofmicrobe within tissues Endophytic referred colonizingplant and withtheir researchresultshave establishingcompatiblerelationship hosts．Many demonstrateda of bacteriaarebeneficialtotheir researchon partendophytic hosts．Therefore thesebacteriahasbecomea inChinaandin otherconturies． hotspot many Bacillus cereusA-47isa strainisolatedfromwheat yield-increasingendophytic roo,ts andcolonizesthe and interiorofwheatrootsat the the thesametime，but rhizosphere mechanism colonizationisstillnotclear．The ofthis isto ofendophytic objectiveexperiment clone of and amutantwith the onor genesflagellinget insertion．Bycomparingpopulation intherootsbetween the strainandthemutant．someindirectevidencesabout parental colonizationha