荧光原位杂交技术检测乳腺癌Her-2neu基因扩增的方法学研究.pdfVIP

天津医科大学硕士论文 中文摘要 背景： 乳腺癌患者预后呈负相关，且与激素治疗及化学治疗的耐药相关，因此， Her-2／neu被认为是一个重要的分子标志，作为乳腺癌的一个独立预后指标对 Her一2／neu基因进行检测，具有指导临床治疗的重要意义。 性结合piSSH阱弘“的胞外区域，明显抑制Her一2／neu扩增或过表达的乳腺瘟细 胞的生长，用于治疗Her-2／neu阳性的乳腺癌患者，因此对Her-2／neu基因的 检测，对指导赫赛汀的使用有重要意义。 荧光原位杂交(FISH)广泛应用于中期及间期细胞的基因扩增、突变、 易位等遗传学改变的研究中，福尔马林固定、石蜡包埋组织的FISH技术的 建立及完善，为Her一2／neu基因扩增的检测提供了检测平台。 目的： 1．探讨福尔马林固定、石蜡包埋组织的Her，2／neu基因扩增的FISH方法 检测的最佳实验条件。2．FISH方法检测淋巴结阳性乳腺癌的Her-2／neu基因 表达。3．Her-2／neu基因扩增的FISH检测方法在组织芯片上的应用。4，探讨 乳腺穿刺细胞学涂片的Her-2／neu基因扩增的FISH检测方法。 方法： 应用球面对称设计对福尔马林固定、石蜡包埋组织的FISH技术中的切 片厚度Xi、NaSCN处理温度x2、蛋白酶K消化时间x3及变住温度Ⅺ共4 个关键因素进行组合试验，拟合出该4个因素与FISH质量之间的关系，对 FISH技术进行优化。 选取40例淋巴结阳性的乳腺癌病例，采用FISH方法检测Her-2／neu基 基因的表达与临床指标、生存率、ER和PR表达之间的相关性，比较FISH 与免疫组化两种方法检测Her-2／neu扩增的差异：将32例乳腺良性病变制作 2 天津医科大学硕士论文 成组织芯片，采用优化FISH方案进行Her-2／neu基因扩增的检测及免疫组化 方法检测C-erbB-2的表达；选取8例乳腺癌穿刺细胞学采用优化FISH方案 进行Her-2／neu基因扩增的检测及免疫组化方法检测C．erbB一2的表达。 结果： 素；且切片厚度和蛋白酶K消化时间对FISH质量还存在交互作用。 基因的扩增；Her-2／neu基因的扩增与年龄、月经状况、临床分期、E肿R表 达情况无统计学关系(均pO．05)；Her-2／neu基因扩增患者的生存期明显较 方法检测也显示存在Her-2／neu基因的扩增，两种方法结果完全相符，7例 法的结果在统计学上高度一致(p=O．00003)。 32例良性乳腺病变中没有Her-2／neu基因的扩增，C．erbB．2免疫组化结果 为阴性。8例乳腺癌穿刺细胞学涂片中有1例存在Her-2／neu基因的扩增。 结论： 1)切片厚度3 化10分钟为FISH的最佳实验条件。 2)Her-2／neu基因扩增是判断乳腺癌预后的独立指标。 的一致性。 4)FISH方法检测Her-2／neu基因扩增可以应用于组织芯片和乳腺穿刺 细胞学涂片。 关键词： 球面对称设计荧光原位杂交Her-2／neu免疫组化C-erbB一2组 织芯片乳腺穿刺细胞学涂片 天津医科大学硕士论文 Abstract Background 30％ofbreast Her一2／neu in20％to fC—erbB一2)geneamplification，identified in and a markerof clinicaloutcome gallcers，is poor node-negative prog