GB/T 25887-2010奶牛脊椎畸形综合征检测　PCR-RFLP法.pdf

lCS 65．020．30 B43 a雪 中华人民共和国国家标准 GB／T25887—2010 of fbr M[ethodPCR_I江LP detectingo叩1pl旺触bral 2011—0卜10发布 宰瞀嬲紫瓣警糌瞥鐾发布中国国家标准化管理委员会仪19 标准分享网 免费下载 25887—2010 GB／T25887—201 0 奶牛脊椎畸形综合征检测 PCR_RFLP法 1范围 本标准规定了奶牛脊椎畸形综合征的PcR-RFLP检测技术。 本标准适用于奶牛脊椎畸形综合征的检测与诊断。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有 的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓勋根据本标准达成协议的各方研究 是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB／T6682分析实验室用水规格和试验方法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3．1 malformatj蚰in 奶牛脊椎畸形综合征 c咖pl既vertebral dairycattle；cVM 奶牛的一种常染色体隐性遗传病，主要表现为母牛流产、胎儿早期死亡、出生后不久死亡，患病犊牛 主要症状表现为：颈短、脊椎畸形、心脏畸形、腿部畸形、系部呈现对称的内向僵直等。 3．2 SLC35A3基因 SLC35A3辨ne 脊椎畸形综合征的致病基因。 3．3 限制性片段长度多态性 r姻tricti蚰fra蛐蜘tlengthpoIymorphism，RFLP 检测DNA用限制性内切酶酶切后形成的特定DNA片段的大小。因此凡是可以引起酶切位点变 异的突变如点突变(新产生和去除酶切位点)和一段DNA的重新组织(如插入和缺失造成酶切位点间 的长度发生变化)等均可导致RFLP的产生。 4原理 sLc35A3基因进行分型，根据基因型判定奶牛是否携带脊椎畸形综合征的致病基因。 5扩增sLc35A3基因片段的引入酶切位点PcR引物 5’CCACTGGAAAAACATGCTGTGAGTA3’ 57GCTCTCCTCTGTAATCCCCA3’ 预期扩增长度为225bp。 1 标准分享网 免费下载 min～10uh～485202257．225887—2010 GB／T25887—2010 附录A (资料性附录) 主要试剂及配制方法 表A．1主要试嗣及配制方法 试剂 配制方法 10mmol／L mmol／L TE缓冲液 Tris_HCl(pH8．0)，1EDTA(pH8．O) 242 mLo．5 gTri