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- 2017-07-17 发布于四川
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- | 2005-09-27 颁布
- | 2005-11-01 实施
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[农牧渔类]GBT 19915.5-2005 猪链球菌 2型多重 PCR检测方法
CCIS5307.010.30 霭黔
中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准
GB/T 19915.5-2005
猪链球菌z型多重PCR检测方法
ProtocolofmultiplexPCRidentificationofStreptococcussuistype2
2005-09-27发布 2005-11-01实施
率督冒瞥臀瓣譬壕臀臀暴发“
GB/T19915.5-2005
前 片习
本标准的附录A为规范性附录。
本标准由国家标准化管理委员会提出。
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。
本标准由中国检验检疫科学研究院负责起草。
本标准主要起草人:韩雪清、林祥梅、吴绍强、刘建、贾广乐、梅琳、陈国强、张敬友、姜众、唐泰山。
本标准为首次发布。
GB/T19915.5-2005
猪链球菌2型多重PCR检测方法
1 范围
本标准规定了猪链球菌2型多重PCR检测的操作方法。
本标准适用于检测生猪拭子、增菌培养物、疑似病料及猪组织样品 猪(淋巴结、扁桃体、肉品等)中的
猪源链球菌及猪链球菌2型。
2 规范性引用文件
下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件,其随后所有
的修改单 不(包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准,然而,鼓励根据本标准达成协议的各方研究
是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注 日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。
GB/T6682-1992 分析实验室用水规格和试验方法。
3 术语和定义
下列术语和定义适用于本标准。
3.1
猪链球菌2型 Streptococcussuestype2
猪链球菌是属于链球菌属的一种细菌,根据其荚膜多糖抗原的差异,可分为 1-34及1/2共35个
血清型。猪链球菌2型是猪链球菌的一个血清型,不仅对猪致病性很强,而且可以感染特定的人群,是
一种重要的人畜共患病病原菌。
3.2
多皿聚合阵链式反应 多(皿PCR)multiplexpolymerisechainreaction
多重PCR又称多重引物PCR或复合PCR,它是在同一PCR反应体系中加上两对以上引物,同时
扩增出多个核酸片断的PCR反应。
4 缩略语
本标准采用下列缩略语:
PCR 聚合酶链式反应
DNA 脱氧核糖核酸
dNTP 脱氧核酸三磷酸
by 碱基对
5 试荆和材料
除另有规定外,所用生化试剂均为分析纯,水为符合GB/T6682-1992的灭菌双蒸水或超纯水。
5.1 猪链球菌2型多重PCR反应混合物
PCR缓冲液 含(Mg),2fzL;dNTP,1.6IL;引物 1,0.6tLL;引物2,0.6IL;引物3,0.6ujL;引物
4,0.6fL;菌液 1.5IiL;酶0.2KL;水 12.3pL;总体积20IL,
5.2TaqDNA聚合酶
5.3 10XPCR缓冲液
100mmol/LKCI,160mmol/L (NH4)ZSO4,20mmol/LMgS04,200mmol/LTris-HCI
GB/T19915.5-2005
(pH8.8),1%TritonX-100,lmg/mLBSA,
5.4 dNTP混合液 各(2.5mmol/L)
5.5 琼脂糖:电泳级
5.6 澳化乙锭
5.7DNA分子量标准
5.8 TE缓冲液
10mmol/LTris-HCl(pH8.0),1mmol/l.EDTA,
5.9 核酸电泳缓冲液
Tris碱242g,冰乙酸57.1mL,O.5mol/LEDTA100mL,加蒸馏水至1000mL,使用时10倍
稀释。
5.10 电泳加样缓冲液
0.
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