第11章-真核基因表达调控-lcq.ppt

第七节 翻译后水平的基因调控 1、蛋白质的折叠 2、蛋白酶的切割 （1）末端切割 蜜毒素 胰岛素 （2）多聚蛋白质切割 3、蛋白质的化学修饰 （1）简单修饰：乙酰化、甲基化和磷酸化 （2）复杂修饰： 糖基化(glycosylation) 4、蛋白质内含子 特点：　　（1）切割位点保守 　　（2）具有自动切割加工能力 （3） 蛋白质内含子片段具有核酸内切酶活性 是一大家族小分子非编码单链RNA，长度约20-25个碱基，由一段具有发夹环结构，长度为70~90个碱基的单链RNA 前体(pre-miRNA)经Dicer酶剪切后形成。 这些成熟的miRNA 与其他蛋白质一起组成RNA诱导的沉默复合体（RNA-induced silencing complex, RISC），通过与其靶mRNA 分子的3 端非翻译区域（3 UTR）互补匹配，再以目前尚不清楚的机制抑制该mRNA 分子的翻译。 第八节 小分子RNA对基因表达的调节 1．微小RNA (microRNA, miRNA) Pre-miRNA Pre-miRNA 是由内源性基因间区或内含子的DNA反向重复序列转录而来,它是一种长约70nt的非编码RNA, 具有茎-环结构也即发夹状结构。 Pre-miRNA在Dicer的作用下可被剪切成miRNA miRNA 只是pre-miRNA 茎中的一个臂 其长度一般为20~25个碱基； 在不同生物体中普遍存在； 其序列在不同生物中具有一定的保守性； 具有明显的表达阶段特异性和组织特异性； miRNA 基因以单拷贝、多拷贝或基因簇等多种形式存在于基因组中，大多位于基因间隔区。 miRNA的特点： MiRNA的生成及作用机制 是细胞内一类双链RNA(double-stranded RNA，dsRNA)在特定情况下通过一定酶切机制，转变为具有特定长度(21－23个碱基)和特定序列的小片段RNA。 双链siRNA参与RISC组成，与特异的靶mRNA完全互补结合，导致靶mRNA降解，阻断翻译过程。 由siRNA介导的基因表达抑制作用被称为RNA干涉(RNA interference，RNAi)。 2．小干扰RNA (small interfering RNA, siRNA) 30bp 双链RNA（dsRNA） 水解生成 21-23nt siRNA 5’ 3’ 3’ 5’ RISC形成 识别特异序列 并使其降解 RNA干扰作用机制 siRNA miRNA 前体 内源或外源长双链RNA诱导产生 内源发夹环结构的转录产物 结构 双链分子 单链分子 功能 降解mRNA 阻遏其翻译 靶mRNA 结合 需完全互补 不需完全互补 生物学效应 抑制转座子活性和病毒感染 发育过程的调节 siRNA 和miRNA的差异比较 * 哺乳动物基因组中，典型的CpG岛密度约 1/100 bp，如 γ-球蛋白基因。 * * 转录区域核小体的结构发生变化，有利于转录因子的结合而促进转录 * 组蛋白磷酸化：H1 乙酰化：H2B * 组蛋白本质上是真核基因调控的负控制因子 组蛋白是碱性蛋白质，带正电荷，可与DNA链上带负电荷的磷酸基相结合，从而遮蔽了DNA分子，妨碍了转录 * Glucocorticoid receptor：糖皮质激素受体 Dissociation解离, dimerization二聚化 Steroid：类固醇 * Interferon-γ：干扰素 在没有类固醇激素时，该受体与抑制蛋白结合，游离在细胞质中. 有类固醇激素时, 激素结合到受体上，将其从阻抑物中释放出来。 受体二聚化并转移到核中。 受体与其特异的DNA结合序列结合 (应答元件) ，从而激活靶基因。 3. 通过磷酸化调控： STAT蛋白 许多激素不能扩散进细胞。 它们通过与细胞表面的受体结合，通过称为信号转导的过程将信号传递给细胞内部的蛋白。 信号转导通常涉及到蛋白质的磷酸化。 如γ-干扰素通过激活一种称为JAK的激酶诱发转录因子STAT1 α的磷酸化 3. 通过磷酸化调控： STAT蛋白 P P P P Interferon-γ IFN- γ receptor JAK kinase Unphosphorylated STAT monomers +2ATP dimerization +2ADP phosphorylated STAT1α dimer Nuclear translocation Response element 3. 通过磷酸化调控： STAT蛋白 （1）未磷酸化的STAT1α 蛋白: 以单体形式存在于细胞质中，无转录活性。 （2）在特异的酪氨酸残基磷酸化的 STAT1α 形 成同型二聚体进入核，激活在启动子处含有