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在AdvanceBioSEC聚集体分析之后
在 AdvanceBio SEC 聚集体分析之后
进行 Protein A 亲和 IgG 捕获
采用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案
应用简报
生物治疗药物与生物制药
作者 摘要
Patrick Cronan、Timothy Rice 和 本应用简报介绍了使用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解决方案对生物治
Michael Kruger 疗样品中聚集体的定量分析。Protein A 亲和捕获在第一维中进行,而体积排
安捷伦科技公司 阻色谱在第二维中进行。多中心切割用于将样品从第一维转移到第二维。这
项技术能够在一次分析中完成整个表征,无需进行馏分收集和多次进样。
前言 实验部分 软件
Agilent OpenLAB CDS ChemStation 版软
蛋白质治疗远远比小分子药物的治疗 仪器
件以及 Agilent 1290 Infinity 二维液相色
复杂,因此,阐明这种复杂性成为了 本研究使用的二维液相色谱解决方案
谱软件用于配置系统、设置二维液相
一个分析难题。在对这些分子进行开 将 Agilent 1260 Infinity 生物惰性液相色
色谱方法以及控制二维液相色谱的数
发和使用期间,需要对它们进行深入 谱作为第一维系统。将 1260 Infinity 生
1 据采集(图 2)。
表征。 物惰性液相色谱系统与安捷伦二维液
Protein A 是在金黄色葡萄球菌细胞壁 相色谱 Quick-Change 快速更换阀头、 样品
中发现的免疫球蛋白-Fc (IgG) 受体。这 多中心切割阀(带有 12 个出厂已安装 样品是购自 Sigma 的 IgG 标准品(部
种蛋白质对多克隆和单克隆 IgG (如 的 40 µL 样品定量环)和 Agilent 1290 件号 I9640)。
Infinity 高速泵联用,用于第二维色谱。
人 IgG 1、IgG 2 和 IgG 4 以及来自兔和
第二维中采用了二极管阵列检测器
小鼠等其他物种的 IgG )具有较强的
(DAD)。图 1 示出了所用的仪器模块。
亲和性。固定化的 Protein A 常用于
IgG 的制备和生产级纯化。Agilent Bio-
Monolith Protein A HPLC 分析型色谱柱
可用于对复杂混合物或纯样品中的 IgG
2,3
进行快速定量分析和小规模纯化 。
体积排阻色谱 (SEC) 则是生物治疗样
品中聚集体定量分析的首选方法。使
用 SEC 聚集体分析之后进行 Protein
A IgG 捕获,可生成更准确的表征结
果,因为所分析的样品更加纯净。采
用 Agilent 1290 Infinity 二维液相色谱解
决方案可使这种分析在一次进样中完
成。IgG 的 Protein A 捕获在第一维中
进行。然后,在多中心切
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