乙肝HBsAg弱反应性血清标本中HBV DNA定量分析.docVIP

乙肝HBsAg弱反应性血清标本中HBV DNA定量分析（河南省黄泛区中心医院 河南 466632） 【摘要】目的：对临床检测中乙肝HBsAg弱反应性血清标本进行HBV DNA定量分析，探讨其相关性及临床意义。方法：收集进行HBsAg定性检测（ELISA方法）的弱反应性临床血清标本，使用罗氏电化学发光免疫分析系统进行HBsAg定量分析，对确认的弱反应性标本使用实时荧光定量PCR分析系统进行HBV DNA分析，对实验结果及其产生机制进行初步探讨。结果：使用国产ELISA试剂检测临床血清标本2351份，使用罗氏检测系统对其中的弱反应性标本133份进行HBsAg定量检测，确认其中103份属于弱反应性标本，再使用实时荧光定量PCR方法进行HBV DNA检测，其中阳性者17例。结论：在我国HBV感染人群中，部分人群的HBsAg表达水平较低，但其体内仍存在HBV病毒复制，因此，必须重视HBV检测中出现的弱反应性结果。 【关键词】乙型肝炎表面抗原 弱反应性 HBV-DNA 【中图分类号】R446.6【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）06-0151-01 HBsAg弱反应性是临床常见乙肝免疫标志物检测结果，但目前对该结果的诠释，包括其与乙肝病毒感染过程和状态的相关性，与乙肝病毒复制状况的相关性等问题并未引起临床的足够重视。本研究拟使用ELISA、电化学发光方法以及荧光定量PCR方法对HBsAg弱反应性标本进行相关研究，初步探讨HBsAg弱反应性与人体对病毒的免疫反应状态和病毒复制状况的关系。 1 材料和方法 1.1样本来源和保存：2009年12月至2010年6月本院住院、门诊及体检患者血清标本2351例。标本在三日内能完成所有实验的，标本在4度冰箱保存，如不能在三日内完成实验的，则将标本放入零下20度冰箱冷冻保存。 1.2 仪器：安图2010酶标仪，罗氏E601模块，罗氏lightcycle 480实时荧光定量PCR仪。 1.3 试剂：科华HBsAg ELISA定性检测试剂，罗氏配套HBsAg定量检测试剂，达安HBV DNA定量检测试剂，质控品与校准品均来自各自厂家配套产品。 1.4 检测方法：所有标本使用科华ELISA试剂检测HBsAg，对其中“灰区”标本和弱反应性标本使用罗氏电化学发光方法对其进行HBsAg定量检测，确定弱反应性标本后，对其进行HBV DNA检测。所有检测均在确认该方法当日当批室内质控在控后，使用随机数表法随机掺入正常检测标本进行检测。 1.5判断标准 1.5.1HBsAg定性可疑标准将ELISA定性检测A值为S／CO 0.8―1.2范围定义为灰区，对该范围的标本进行2份复检，2份中至少有1份位于灰区者为结果可疑，否则为阴性。 1.5.2HBsAg定性弱反应性标准将ELISA定性检测A值为S／CO 1.2―1.5范围的标本进行2份复检，2份检测A值均在该范围为弱反应性（以“±”表示）。其中1份在该范围为可疑，2份均无反应则须重新采血复查，仍无反应者报告阴性。 1.5.3HBsAg定量有反应性标准 ≥0.05 IU／ml有反应性。 1.5.4HBV DNA定量阳性标准≥5.0×102 copies／ml为阳性。 1.6统计学方法，对均数的比较使用t检验，率的比较采用卡方检验，统计学软件采用SPSS 10.0。 2 实验结果 2.1科华ELISA检测结果 2351份样本中，HBsAg处于灰区者81份（0.124%），弱反应性者52份（0.089%）。 2.2弱反应性样本经罗氏电化学发光试剂定量检测结果对81份定性灰区样本和52份弱反应性样本进行了定量检测，结果有反应性者分别为61份和42份，符合率分别为75.3%和80.7%。 2.3HBV DNA检测情况 见表1。对上述103份确认的弱反应性样本，以及30份假阳性样本进行HBV DNA检测，弱阳性标本中阳性17份，阳性率16.5%，结果分布区间：2.7×103copies／ml～4.2×105copies／ml，均值5.7×104copies／ml ，在30份复查阴性标本中，阳性者2份，结果为3.3×103copies／ml，4.1×104copies／ml，阳性率6.7%。弱反应性标本中HBV DNA阳性率与假阳性标本中HBV DNA阳性率有显著性差异。 表1 乙肝HBsAg弱反应性血清标本中HBV DNA定量分析 P0.05,无显著性差异；# P0.05,无显著性差异；** P0.01，有显著性差异；*** P0.001，有显著性差异； 3 讨论 用ELISA方法检测HBsAg是临床大规模使用的乙型肝炎感染检测