乙酰肝素酶及血管内皮生长因子在原发性膜性肾病患者肾小球内表达及意义.docVIP

乙酰肝素酶及血管内皮生长因子在原发性膜性肾病患者肾小球内表达及意义【摘要】目的：探讨乙酰肝素酶（Heparanase,Hpa）和血管内皮生长因子（VEGF）在原发性膜性肾病（idiopathic membranous nephropathy，IMN）患者肾小球中的表达及与蛋白尿的关系。方法：用免疫组化法检测36例IMN患者与6例正常对照者肾小球内Hpa和VEGF的表达情况。结果：（1）Hpa 和VEGF在对照组正常肾组织的肾小球基底膜及肾小管上皮细胞仅有少量表达。在IMN组肾小球基底膜及肾小管上皮细胞表达较对照组均明显增强（p0.05），肾小球内VEGF表达差异有显著性（p0.05）. There was significant difference of the expression of VEGF between I and II stage IMN group（p 1 对象与方法 1.1 一般资料:病例来源于2005年11月至2007年8月间在本院肾内科病房诊治的36例原发性膜性肾病患者，所有患者均为首次经临床和病理确诊者。6例正常对照肾组织来自因肾脏良性肿瘤行一侧肾脏切除术患者，肾组织标本取自上述患者远离病灶周围的正常肾组织。 1.1.1 入选标准：肾组织所取标本经MASSON及MASSOM+PASM染色，在光镜下可见肾小球上皮下嗜复红蛋白沉积，肾小球基底膜弥漫均匀增厚、空泡变、或钉突形成、或链环样改变，且免疫荧光可见IgG、C3沿肾小球基底膜沉积的IMN患者。 1.1.2 排除标准：除外结缔组织病、肝炎病毒或慢性肝炎、恶性实体肿瘤相关性MN患者及肾穿刺活检前曾服用过皮质类固醇激素、细胞毒药物、他汀类降脂药物、血管紧张素转换酶抑制剂（ACEI）及血管紧张素II受体拮抗剂（ARB）类药物的IMN患者。 1.2 分组方法 1.2.1 实验组（IMN组）：36例IMN，男21例，女15例，平均年龄43岁。IMN组根据病理改变分期再分为两个亚组，其中I期IMN组30例，男18例，女12例，平均年龄45岁;II期IMN组6例,男3例,女3例,平均年龄33岁。 1.2.2 对照组：6例因肾脏良性肿瘤行一侧肾切除术患者，肾组织标本取自上述患者远离病灶周围的正常肾组织。男5例，女1例，平均年龄岁46岁。 1.3 临床观察指标:血清肌酐、白蛋白、24小时尿蛋白定量。 1.4 免疫组化检查:按SP法进行。肾组织切片3um，常规脱蜡、水化，3% H2O2室温下孵育。0.1mol/L枸橼酸盐缓冲液（PH6.0）中行高压抗原修复。10%正常山羊血清封闭。一抗分别为兔抗人乙酰肝素酶单克隆抗体（稀释1∶75购自武汉博士德试剂公司）；兔抗人血管内皮生长因子单克隆抗体（稀释1∶300），37℃孵育。生物素标记山羊抗兔、大鼠、小鼠和豚鼠IgG37℃孵育。辣根酶标记链酶卵白素工作液37℃孵育。DAB显色。苏木素复染。以PBS替代一抗作为阴性对照。 1.5 免疫组化结果判定:在胞浆或胞膜处有棕黄色或棕红色颗粒状物质沉积为阳性细胞。不着色为阴性。采用北航病理图像分析系统，通过光学显微镜放大400倍摄取图像，输入图像分析系统内，对图像进行灰度变换，使阳性面积与背景分开，进行自动测量。肾小球Hpa、VEGF免疫组化阳性面积测定：在光学显微镜计算机图像分析系统屏幕上，每例标本400倍镜下随机观察5个肾小球，分别计算每个指标的阳性面积与整个肾小球面积的比值，取其平均值作为每例标本每个指标肾小球阳性面积的比值。 1.6 统计学方法:统计学分析均采用SPSS11.0计算机软件包处理，计量资料采用均数±标准差表示，样本均数间比较采用t检验，组间比较采用方差分析，各参数间的相关性分析采用pearson 相关分析。 p0.05）（表2）。 表2 IMN与对照组患者肾小球Hpa和VEGF的表达情况 *:p0.05,无统计学意义，在I期IMN VEGF与24小时尿蛋白定量呈正相关关系，r0.38,p Hpa降解或破坏HSPG时可以释放VEGF。VEGF可能具有正反两方面的作用[13]。首先VEGF可能具有肾脏保护作用。因其有促进内皮细胞增殖、分化、存活、促进血管生长、建立侧枝循环和改善血流动力学等生物学作用。另有观点认为VEGF对肾脏也有有害的一面。VEGF能够减少GBM的阴离子数目，诱导肾小球内皮细胞的小窗形成，VEGF可能通过同时影响GBM的电荷屏障及机械屏障而影响肾小球的通透性，VEGF分泌的异常增加可以导致肾小球滤过膜对血浆蛋白通透性的增加，从而导致蛋白尿的形成。本实验结果显示VEGF在对照组正常肾小球有少量表达，而在IMN表达增加，但随分期分组的不同其表达