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微波辅助提取法提取金针菇多糖工艺探究摘要：采用微波辅助提取法对金针菇多糖进行提取，通过单因素试验及正交实验优化确定出金针菇多糖最佳提取工艺如下：微波功率350w，水料比35∶1，微波处理时间9min，提取次数为2次，在此条件下，多糖提取率为1.26%，远远高于水提法。 关键词：金针菇；多糖；微波辅助提取法；工艺 中图分类号： S646.15 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2010）-12-0075-2 0 引言 近年来，天然植物多糖的生物活性是目前科学研究的热点。天然植物多糖能提高机体的免疫功能，具有多种生物功能［1］。多糖是金针菇中重要的生物活性物质，相关研究表明，金针菇多糖是一类主要以β-（1，3）糖苷键连接的葡聚糖，具有抑制肿瘤、抗癌、降血糖、降血脂和增强机体免疫力等作用［2］。但目前金针菇多糖其提取率低及价格较高而限制了应用，因此如何提高金针菇多糖的提取率，减低成本是其大规模应用的前提。 微波辅助提取技术（MAE）是近年来兴起的生物活性物质提取技术。其原理是利用不同组分吸收微波能力的差异，使萃取体系中的某些组分被选择性加热，从而使得被萃取物质从体系中分离，进入到介电常数较小、吸收能力相对较差的萃取剂中，达到较高的提取率。微波辅助提取法与传统的回流提取法相比具有高效、清洁等特点，目前已广泛应用于天然药物的分离提取［3］。本研究将微波辅助提取技术引入金针菇多糖的提取与分离中，以期探索出一条高效的、适应工业化生产的金针菇多糖提取工艺路线，为其进一步开发利用提供技术保证。 1 材料与方法 1.1 材料与试剂 金针菇子实体（市售，干燥至恒重，粉碎过40目筛）；95%乙醇（AR）；浓硫酸（AR）；苯酚（AR）；三氯甲烷（AR）；正丁醇（AR）；葡萄糖（AR）。 1.2 仪器 HH-S恒温水浴锅（江苏金坛市正基仪器有限公司）；722分光光度计（上海光谱器有限公司）；WD800型Galanz微波炉（格兰仕微波炉电器有限公司）；RE-52AA旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂）；KDC-1044低速离心机（科大创新股份有限公司中佳分公司）。 1.3 试验方法 1.3.1 多糖含量测定 采用苯酚-硫酸法［4］，以葡萄糖为标准样品。精确称取0.1g葡萄糖，用蒸馏水定容至100ml容量瓶中，摇匀备用。吸取上述1mg/ml的葡萄糖溶液0.00、1.00、2.00、3.00、4.00、5.00、6.00分别用蒸馏水稀释至50ml容量瓶中，得到不同浓度的葡萄糖标准溶液。从各个瓶中准确移取2.00ml，置于25ml具塞比色管中，加入5%苯酚溶液1.00ml，摇匀，迅速加入浓硫酸5.00ml，静置10min后，置于35℃水浴加热40min，冷却至室温，用分光光度计在490nm处测定吸光度，制作标准曲线（图1），得回归方程为y=0.0415x+0.0405，R2=0.9979。 图1 葡萄糖标准曲线 1.3.2 微波辅助提取法提取金针菇多糖 精密称取金针菇粉末5g，加入一定量的蒸馏水放于150ml三角瓶中，置于微波炉中调整微波功率、微波处理时间、水料比进行提取。过滤，取滤液，提取数次，合并滤液减压浓缩至1/10体积，95%乙醇（1:2）沉淀多糖，过夜，离心去上清，流沉淀，用蒸馏水定容到50ml容量瓶中，去蛋白，收集上清液，测吸光度值，计算多糖得率。 2 结果与分析 2.1 微波功率对金针菇多糖提取率的影响 微波功率分别为150W、250W、350W、450W、550W，在水料比40:1、处理时间8min、提取3次的条件下提取，金针菇多糖提取率分别为0.24%、0.87%、1.18%、0.96%、0.67%。多糖提取率随微波功率增大而逐渐上升，但到达350W开始下降，可能是由于多糖水解程度加大而造成的。同时功率大时，提取时提取液粘稠度增加，使过滤困难，故功率为350W是比较适合的。 2.2 水料比对金针菇多糖提取率的影响 水料比分别为10:1、20:1、30:1、40:1，在微波功率350 W、处理时间8min、提取3次的条件下提取，金针菇多糖提取率分别为0.87%、1.02%、1.16%、1.18%。多糖提取率随着加水量的上升而逐渐上升，但当加水量超过30:1后，提取率没有明显上升，考虑材料和能耗，因此确定水料比30:1是比较适合的。 2.3 微波处理时间对金针菇多糖提取率的影响 微波处理时间分别为6、8、10、12、14min，在微波功率350W、水料比30:1、提取3次的条件下提取，金针菇多糖提取率分别为0.69%、1.16%、1.23%、1.14%、1.07%。随着微波处理时间的延长，多糖提取率先上升，达到一定