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温度在水稻花药培养过程中影响探究摘要：研究主要通过对水稻花药培养的每个阶段进行不同的温度处理，探讨了水稻花药培养过程中不同阶段的最适温度。结果表明：水稻花药在培养前必须要经低温预处理，其最适的预处理温度为8℃，时间以8d为宜；而花药在诱导培养前必须接受受热击处理，温度以35℃，时间持续24d为最好；进行诱导培养时，其最佳的培养温度为28-30℃，27℃为最适的分化培养温度。 关键词：水稻花药培养；愈伤组织诱导率；分化率；白化苗 中图分类号：S511 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2010）-11-0068-2 1 材料与方法 1.1 试验材料 籼粳杂交F1代材料ZR-41、ZR-64、SH-50均采自绵阳市农业科学研究所水稻实验田。 1.2 培养基 1.2.1 诱导培养基 N6+2mg.L-12,4-D+2mg.L-1NAA+75mg.L-1Na2SiO3 +6%蔗糖+0.7%琼脂。培养基pH为5.8。 1.2.2 分化培养基 MS+2mg.L-1KT+2mg.L-1 NAA+1mg.L-1 IAA+6%蔗糖+0.7%琼脂，培养基pH为5.8。 1.3 培养方法 在供试材料剑叶的叶枕距为5-10cm时，选取淡黄绿色主穗。把取下的主穗整理为带两张叶片并用湿毛巾包裹，外套塑料袋，置低温下预处理。接种时先剥出幼穗，用醋酸洋红染色进行镜检，选取花粉母细胞处于单核靠边期的小穗，经灭菌清洗后接种于诱导培养基上。待长出愈伤组织后，将2-3mm大小的愈伤组织转到分化培养基上进行分化培养，每天光照强度为2000lx，光照时长14h/10h(光照/黑暗)。 本研究低温预处理的温度分别为4℃、8℃和12℃，处理持续时间分别为2d、4d和8d；诱导培养前经热击处理的温度分别为30℃、35℃和40℃，持续时间为12h、24h和36h；诱导培养温度分别为25℃、27℃和30℃；分化培养温度分别为25℃、27℃和30℃。 水稻花粉组织培养所产生的愈伤组织诱导率、绿苗分化率、白化苗率和绿苗产量的计算公式如下： 愈伤组织诱导率=(愈伤组织块数/接种花药数)×100%； 绿苗分化率=(绿苗数/愈伤组织块数)×100%； 白化苗率=(白化苗数/愈伤组织块数)×100%； 绿苗产量=愈伤组织诱导率×绿苗分化率。 2 结果与分析 2.1 低温预处理对水稻花药培养愈伤组织形成的影响 对供试材料ZR-41、ZR-64、SH-50经不同低温处理，分别于8月3日、4日和5日接种在愈伤组织诱导培养基上，低温处理扰乱了细胞质的分布和核分裂，使花粉转向形成胚。在所有的温度处理中，在4℃下，以4d处理愈伤组织诱导率较高，在8℃下，以8d处理较高，在12℃下，以8d处理较高（表1）。说明预处理温度越低，处理时间愈短，预处理温度越高，处理时间愈长，在12℃下，随着处理时间的延长，愈伤组织诱导率逐渐增加，但超过8d后，增加幅度急剧下降。三个水稻品种经8℃处理8d后的愈伤组织诱导率最高，分别为3.32%、15.24%、23.17%。 表1 低温预处理对水稻花药培养愈伤组织形成的影响 温度（℃） 愈伤组织诱导率(%) ZR-41 ZR-64 SH-50 2d 4d 8d 2d 4d 8d 2d 4d 8d 4 1.4 2.71 2.24 11.08 13.82 12.49 16.58 22.44 17.43 8 2.04 2.26 3.32 9.57 13.36 15.24 15.97 22.56 23.17 12 1.31 1.52 1.61 8.45 10.98 11.27 13.69 18.08 19.34 2.2 诱导培养前热击处理对水稻花药培养愈伤组织诱导率的影响 把水稻花药接种于诱导培养基上，置于水浴恒温箱进行高温热击处理，然后再进行愈伤组织诱导培养。高温热击处理能加快小孢子分裂，诱导出愈伤组织的高峰期较未处理提前了6-9d。35℃热击处理24h的水稻花粉出愈率最高，35℃热击处理，随着时间延长，出愈率逐渐增加，超过36H则呈下降局势，40℃热击处理，随着时间延长，出愈率逐渐减少。但随着温度的提高和热击时间的延长，白苗率不断上升。 表2 热击处理对水稻花药培养愈伤组织诱导率的影响 温度（℃） 愈伤组织诱导率(%) ZR-41 ZR-64 SH-50 12h 24h 36h 12h 24h 36h 12h 24h 36h 30 1.69 2.98 3.68 13.51 13.79 14.52 23.95 25.63 28.64 35 2.48 3.95 3.58 1