玫瑰海棠叶片培养及快速繁殖.doc

玫瑰海棠叶片培养及快速繁殖摘要： 玫瑰海棠（Begonia mannii)是秋海棠属的一种多年生常绿草本花卉。在北方多作多年生栽培，在南方由于无法越夏，多做一年生栽培。其花期长达4-6个月，较耐荫，适于室内栽培观赏，具有较高的经济价值。玫瑰海棠的分株能力弱，传统方法采用茎段扦插成活力低，繁殖速度慢，无法满足市场需求；同时，由于玫瑰海棠不耐热，培育耐热玫瑰海棠品种十分迫切。 关键词：玫瑰海棠；叶片；培养；快速繁殖 中图分类号：Q813.1+2 文献标识码：A 文章编号：1674-0432（2011）-10-0065-1 1 植物名称 玫瑰海棠。 2 材料类别 叶片。 3 培养条件 以MS为基本培养基。（1）不定芽诱导培养：MS+6-BA2.0+NAA0.2；（2）芽分化扩繁培养：MS+6-BA1.5+NAA0.3或MS+6-BA1.0+NAA0.3；（3）壮苗培养：MS+6-BA0.5+NAA0.5（4）生根培养：1/2MS+NAA0.；（5）其他条件：在以上培养基中均需要加入蔗糖30g/L、琼脂5.5g/L，培养温度为25±2℃，光照强度约为15umol/m2s，光照时间10hr/d。 4 生长与分化情况 4.1 外植体的消毒方法 在玫瑰海棠的外植体消毒处理过程中我采用二次升汞消毒的方法，取得了较好效果。在进行组织培养的过程中，人们常用的外植体处理方法是：首先用70%的酒精对外植体材料进行浸泡，然后在升汞溶液中浸泡一次，洗干净后进行接种，这种方法在玫瑰海棠的叶片无菌消毒处理过程中成功率很低，因为一方面外植体叶片在进行酒精浸泡时会受到很严重的伤害，另一方面，在升汞溶液中连续浸泡时间过长，材料也容易受到伤害，因此这种处理方法要不污染率较高，要不褐化死亡率较高，不易诱导成功。基于上述原因，我对玫瑰海棠叶片的外植体处理方法进行了一些技术改进，并取得了很好的处理效果，大大提高了叶片诱导的成功率。 玫瑰海棠叶片外植体消毒方法：挑选花形大，色泽鲜艳，长势良好的植株，剪取当年生叶片作为外植体材料，用中性肥皂水泡上5min，放到自来水上冲洗30min，冲好后稍微放置几分钟，让大部分水分自动滤去，考虑酒精浸泡对叶片损伤严重的后果，改用酒精棉并将其尽量拧干后用来反复多次擦拭叶片，擦拭力度要尽可能轻柔一些，擦拭过程中要不断更换干净的酒精棉，至少擦拭2遍以上，擦好后把叶片放到0.1%HgCl2消毒3min，时间到后用无菌水洗三次，接着用0.1%HgCl2加入土温-80两三滴摇均后进行第二次浸泡，时间为8min，无菌水清洗6-8次，至无泡沫为止，然后进行接种诱导。 在二次浸泡的方法中累计升汞浸泡的时间为11分钟，这种处理措施与采用升汞一次浸泡11分钟相比较，二次浸泡死亡褐变率以及污染率均低于一次浸泡，因此大大提高了诱导的成功率。 4.2 诱导接种培养 把消毒好的外植体接种材料放在无菌吸水滤纸上，吸干叶片表面上的水分，把外植体材料剪成面积约为1cm2的小块，剪口边沿有粘液渗出时要用无菌虑纸吸除掉。把剪好的外材小叶块接种到不定芽诱导培养基：MS+6-BA2.0+NAA0.2中，诱导接种时将小叶块正面朝上放平，以充分接触到培养基为宜。接好后摆放到温度条件为25±2℃的培养室中进行培养，按照光强度10umol/m2s、8hr/d进行补光。诱导培养20天后进行观察，小叶块侧边剪口开始增厚膨大，部分叶块正面开始变皱，慢慢地形成许多小突起。继续培养至40-60天时，切块侧边的增厚膨大处形成大量的绿色不规则愈伤组织，叶块正面的折皱小突起逐渐形成芽点，以后陆续抽出小苗。 4.3 芽分化继代培养 把诱导得到的绿色愈伤组织和带芽点的组织块转接到不定芽分化继代培养基：①MS+6-BA1.5+NAA0.3；②MS+6-BA1.0+NAA0.3；通过对①和②的对照培养，①中形成的愈伤组织多，丛状芽点多，增殖速度比较快，周期短，有利于在前期的扩繁培养中使用；②中培养25天后，一部分愈伤组织慢慢地抽出小芽，连续两次用②号培养基继代培养后原来的小芽点基本上都抽成了小苗，愈伤组织逐渐变少，扩繁倍数逐渐变低，该配方适合在生产的增殖后期使用。 4.4 壮苗培养 继代增殖培养中抽出的小芽把它转接到壮苗培养基MS+6-BA0.5+NAA0.5中，培养25-30天后可以得到大量整齐的健壮苗，并生长出少量的须根。进行壮苗培养，有利于控制生根苗的质量和整齐度，可提高炼苗的成活率。 4.5 生根培养 经过壮苗培养的小苗转接到生根培养基：1/2MS+NAA0.5中，培养20-25天长出4-8条长约3cm的不定根。 4.6 移栽炼苗 制备好炼苗基质：腐叶土过筛，和珍珠岩按