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一种新型酰胺基固定相的研发——反相HPLC色谱对不同组分植物激素的分离摘要：一种新型酰胺基硅胶固定相的制备始于N-Boc-苯丙氨酸、酚酞单磷酸二环己胺盐以及球型硅胶(4 mm, 60?)。酰胺基配体的合成具有高收率。通过SEM、IR以及元素分析对所得的酰胺基固定相进行表征。得到能够承载极性酰胺基组分的选择体会被用于从13种不同组分植物激素的反相色谱分离。酰胺基固定相分离所得的分析物的色谱分析状况会与相同条件下的RP-C18色谱柱的色谱分析状况进行比较。流动相、pH值、流速、温度等因素对该分离系统的影响将会被研究。通过调节梯度洗脱的水体流动相pH=6.85，磷酸钾缓冲液（20mM）以及20℃柱温度的乙腈的反相HPLC能够实现最佳分离。在这些实验条件下，12种植物激素能够被分离出来并能够在230nm或270nm的波长下检测出来。简介高效液相色谱分析对于化学物组分广泛的分析具有非常重要的作用。所用固定相的性能对该技术分离效果的影响很大。所以，高效固定相的设计对HPLC的色谱分析而言尤为重要。对色谱分析来讲，新型酰胺基固定相的研发仍然是一个巨大的挑战。C8和C18烷基链的改性硅胶仍然是反相HPLC应用最广泛的固定相。除了用以分离酸性、碱性极性化合物的非极性RP配体以外，RPLC的最新发展趋势还涉及到含有极性基团的固定相的应用。化学键合氰基，二醇，环糊精，内嵌酰胺聚乙二醇和烷基氨基甲酸酯或其他功能的中等极性固定相，最初主要打算在反相富水流动相中应用。随后，极性固定相对极性分析物展现了新的性能。最新的研究调查表明含有极性基团的固定相在分离碱性分析物方面要比传统的C8和C18色谱柱具有更为优越的性能。极性基团，特别是酰胺基，最初之所以被选用就是因为其具有与碱性分析物发生反应的能力。此外，酰胺基基团还对低分子量的酸性分析物有较高的选择性。含有嵌入式极性基团的固定相具有不同的选择性，较小的保留性，流动相中有机溶剂的浓度更低。低浓度的激素植物在植物发育的不同阶段，如细胞分裂，扩大和分化；器官形成；种子休眠与萌发；叶器官的衰老和脱落等，参与发挥了许多重要的作用。自从第一个植物激素，生长素，发现于1926年，科学家发现植物激素的几种类型，主要包括生长素，细胞分裂素，赤霉素，脱落酸，乙烯。与生长素类似性能的氯化苯氧基酸也被称为除草剂（方案1：2,4-D，2,4-DP，2,4-DB，2,4,5-T和4-PA）。除草剂能够在农业生态系统迁移，由于其在水中的溶解度，会造成地表水和地下水的污染。方案1. 通过新型酰胺基硅胶色谱柱分离的植物激素的化学结构HPLC在分离这些极性植物激素的分析物方面是一种应用极为广泛的技术手段。液相色谱与质谱联用技术(LC-MS)也被提出用于C18柱测定生长素和脱落酸。然而，生长素，细胞分裂素，脱落酸有着非常不同的植物生理功能和化学性质。所以研发用以分离不同组分植物激素的反相HPLC的固定相和分离方法非常具有挑战性。基于我们的文献综述，关于处理不同类型的植物激素分离的文章很有限。在过去的几年中，据报道Zhen Maa和其同事采用液相色谱与质谱联用技术通过C18色谱柱成功分离了四组激素。作者指出该论文是第一个实现四种类型植物激素分离的文章。在这个研究种，8种植物激素在50分钟内被分离出来。在许多其他类似的研究，反相高效液相色谱法多用于激素测定和分离。在我们广泛的文献回顾种，我们未能发现任何一篇描述用高效液相色谱法测定不同类别的十二个激素的分离。因此，我们在这里描述的是一种新的酰胺固定相的发展，用作13种植物激素分离的一种色谱柱，包括吲哚-3-乙酸（IAA），吲哚丙酸（IPA），吲哚丁酸（IBA），脱落酸（ABA），玉米素（Z），6-苄氨基嘌呤（BAP），激动素（K），萘乙酸（NAA），2,4,5 -三氯苯氧乙酸（2,4,5-T），2,4-二氯苯氧基丙酸（2,4-DP），2,4-滴丁酸（2,4-DB），对氯苯氧乙酸（抑制）和二氯苯氧乙酸（2,4-D）（方案1）。新型固定相的制备涉及酰胺配体和通过将该配体附于球形硅胶粒子表面（4mm，60?）的改性硅胶的合成。流动相，流速和温度，pH值等不同分离条件在这个13种植物激素系统中的保留行为的影响的被研究，12种植物激素会被分离出来。现有市场上效果最好的ODS柱C18在两种不同的pH条件下对13种植物激素进行反相色谱反相，两类色谱柱所得的结果会相互比较。两类色谱柱的最佳分离条件在图1和图2.中已经给出。图1. 在最佳条件下，pH=6.85时，L-Pr-Si和ACE-C18两类色谱柱对植物激素的分离。梯度洗脱：磷酸缓冲液中的ACN(pH:6.85,20mM), 0–20 min;10–25%, 20–30 min;25–90%.流速：0–13min;0.9mL/min,13–30dk;1.2mL/