- 1、本文档共64页,可阅读全部内容。
- 2、原创力文档(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
western blot - 全式金
蛋白穿越重现之旅
——Western Blot技术
北京全式金生物技术有限公司
Western Blot 的起源和应用及原理
Western Blot实验流程详解
Western Blot实验中的常见问题分析
• Western Blot 蛋白质印迹法
• 又称免疫印迹试验,它是分子生物学、生物化
学和免疫遗传学中常用的一种实验方法。
• 基本原理是通过特异性抗体对凝胶电泳处理过
的细胞或生物组织样品进行着色。通过分析着
色的位置和着色深度获得特定蛋白质在所分析
的细胞或组织中表达情况的信息。
Western Blot起源
• Renart, J., J. Reiser, G. R. Stark, (1979). Transfer of proteins from gels to
diazobenzyloxymethyl-paper and detection with antisera: a method for
studying antibody specificity and antigen structure. Proc Natl Acad Sci
U S A 76(7): 3116-20.
• DNA杂交技术,Southern Blot 1975
• RNA杂交技术,Northern Blot 1977
• 蛋白质印迹技术,Western Blot 1979
Western Blot 的应用
• 定性或半定量分析目的蛋白的特异性表达
• 蛋白-蛋白、蛋白-DNA和蛋白-RNA相互作
用的后续分析
• 蛋白修饰的鉴定(磷酸化、糖基化的鉴定)
Western Blot实验原理
• 直接法 • 间接法
Western Blot 的起源和应用及原理
Western Blot实验流程详解
Western Blot实验中的常见问题分析
Western Blot实验流程
样品制备及定量 SDS转膜
显色发光 抗体杂交 封闭
样品制备 SDS
及定量 电泳 转膜
显色 抗体杂交 封闭
样品制备
• 总体原则
– 整个提取过程在低温下进行,保持蛋白处于溶
解状态,防止蛋白变性、降解与修饰。
– 根据实验目的选取不同抽提液和抽提方法。
有时需要去除体系中的核酸、无关蛋白等干扰成分
– 方法简便,耗时短,易于操作。
– 制备好的样品若不立即使用,需分装冻存于-
80℃冰箱,及防止储存过程中降解。
样品制备方法简介
• 培养细胞的裂解 • 组织细胞的裂解
弃细胞培养基 冰上分离目的组织
1 ×PBS洗涤 液氮研磨
加入细胞裂解液 加入细胞裂解液
冰上裂解细胞 冰上裂解组织细胞
离心收集上清 离心收集上清
细胞裂解液
组分 作用
您可能关注的文档
- 模糊综合评价分析两种生物农药单剂对小麦储藏品质的影响.pdf
- 实验一蒸馏与分馏1.doc
- 基于文本挖掘与神经网络的音乐风格分类建模方法.pdf
- 钛基纳米多孔金电极对甲醛氧化的电催化活性 - 无机化学学报.pdf
- 封面:武汉大学校园卡使用手册 - 武汉大学网络中心.doc
- 合成多肽对结核分枝杆菌的胞内抑制作用 - 新型炭材料.pdf
- 利用aflp 分析茄科细菌性斑点病菌之变异性并选殖与致病性相关之 .pdf
- 第七章农药基础知识 - 陇东学院.ppt
- vip3aa 及cry1ac 对棉铃虫幼虫多种酶活力的影响 - 应用昆虫学报.pdf
- 燕窝蛋白质样品制备方法的比较及其双向电泳分析 - 中国农学通报.pdf
文档评论(0)