利用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中mutm 的相互作用蛋白.pdf

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2015, 42(10): 935~946 用串联亲和纯化的方法筛选耻垢分枝杆菌中 MutM 的相互作用蛋白* 1, 2) 2) 2) 2) 1) 2)** 2)** 范尚华 周 盈 张泓泰 Joy Fleming 喻子牛 张先恩 毕利军 (1) 华中农业大学生命科学技术学院，农业微生物学国家重点实验室，武汉430070； 2) 中国科学院生物物理研究所，中国科学院核酸生物学重点实验室和生物大分子国家重点实验室，北京100101) 1 摘要 MutM(formamidopyrimidine-DNA glycosylase，Fpg)是原核生物碱基切除修复系统(BER) 中同时具有DNA 糖苷酶和脱嘌 v 0 呤/ 脱嘧啶AP 裂解酶活性的一种双功能酶，不但可以识别DNA 损伤，而且能切除损伤的碱基，从而参与到许多种损伤的 7 修复过程 除了高致突变率的8- 羟基鸟嘌呤(8-oxoguanine ，8-oxoG)外，MutM 在其他损伤修复中具体作用机制还不清楚 3 本研究主要以耻垢分枝杆菌(M smegmatis)为研究对象，利用串联亲和纯化技术和质谱相结合的方法对可能与MutM 相互作用 1 0 的蛋白因子进行发现和鉴定，并于体外用Far-western 和GST pull-down 方法对鉴定出的蛋白DEAD-box rna helicase 、RpsC、 . UvrA 与MutM 的相互作用进行了验证 实验结果表明，利用串联亲和纯化方法来发现MutM 相互作用的蛋白是切实可行 5 0 的 本研究为进一步深入研究MutM 在 参与的损伤修复中的具体机制提供了切入点 6 1 关键词 耻垢分枝杆菌，碱基切除修复，MutM，串联亲和纯化 0 学科分类号 Q5 ，Q7 DOI: 10.16476/j.pibb .2015.0065 2 : v i X a n 对于所有活的生物体，保持基因组的稳定性是 氧(ROS)攻击DNA 链中的鸟嘌呤，使之氧化而产 i [4] h 至关重要的，但每个生物体又不可避免会受到来自 生 ，它是一种致突变的DNA 损伤，既可以与C c 种致突变因素的影响，外源的如辐射、化学诱变 配对，也可以和A 进行配对，后者的发生可以导 剂等，内源的如活性氧类物质 (ROS)、活性氮 致G:C 到T:A 的颠换 大肠杆菌中有3 种DNA 糖 (RON) 等 这些因素可以改变DNA 碱基的结构特 基化酶参与到8-oxoG 的修复，它们分别为MutT、 性，从而造成DNA 损伤 为此，生物体在进化过 MutY 和MutM ，三者在8-oxoG 修复过程中的催化 程中建立了不同的DNA 修复途径，包括错配修复 机制不同 MutT 负责将单独的8-oxo-dGTP 水解为 (MMR) 、核苷酸切除修复(NER) 、碱基切除修复 8-oxo-dGMP，可防止8-oxoG 在DNA 复制时进入 (BER) 、重组修复和SOS 效应等[1] 中碱基切除 基因组，MutY 则切除与8-oxoG 错配的A 以减少 修复对由氧化、烷基化和去氨基化等造成的范围较 错误蔓延，以上两种都不能切除 DNA 链中 广的小损伤修复起着主导作用[2] 这些特定损伤的 8-oxoG，只有 MutM 具有这种能力[5]