甘蓝型油菜热激蛋白bnp23相互作用蛋白的筛选和鉴定.pdf

２０１１年８月 中国油料作物学报 ２０１１，３３（４）：３１８－３２４ Ｃｈｉｎｅｓｅｊｏｕｒｎａｌｏｆｏｉｌｃｒｏｐｓｃｉｅｎｃｅｓ 甘蓝型油菜热激蛋白Ｂｎｐ２３相互 作用蛋白的筛选和鉴定 １，２ １ １ ２ 王　芳 ，刘　超 ，吴江生 ，张忠明 （１．华中农业大学作物遗传改良国家重点实验室，湖北 武汉４３００７０； ２．华中农业大学农业微生物学国家重点实验室，湖北 武汉４３００７０） 　　摘要：以甘蓝型油菜热激蛋白ｐ２３（Ｂｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓｈｓｐ２３，Ｂｎｐ２３）为诱饵蛋白，用酵母双杂交ＬｅｘＡ系统筛选拟 南芥幼苗的ＡＤ－ｃＤＮＡ（ａｃｔｉｖａｔｏｒｄｏｍａｉｎ－ｃＤＮＡ）文库，分离了３９个酵母双杂交阳性克隆，其中两个阳性克隆的 ｃＤＮＡ片段均编码拟南芥黑芥子酶结合蛋白（ＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａＰＹＫ１０结合蛋白１，ＡｔＰＢＰ１）。Ｂｌａｓｔｐ搜索到油菜 黑芥子酶结合蛋白ＢｎＭＢＰ６与拟南芥ＰＢＰ１同源。经体外实验进一步证实ＡｔＰＢＰ１和Ｂｎｐ２３之间存在相互作用。 酵母双杂交实验也证实Ｂｎｐ２３能够与ＢｎＭＢＰ６相互作用。 关键词：酵母双杂交；Ｂｎｐ２３；ＡｔＰＢＰ１；油菜黑芥子酶结合蛋白 中图分类号：Ｑ７８１，Ｓ５６５．４　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００７－９０８４（２０１１）０４－０３１８－０７ ＳｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎｓｉｎｔｅｒａｃｔｉｎｇｗｉｔｈＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎ２３ １，２ １ １ ２ ＷＡＮＧＦａｎｇ ，ＬＩＵＣｈａｏ，ＷＵＪｉａｎｇ－ｓｈｅｎｇ ，ＺＨＡＮＧＺｈｏｎｇ－ｍｉｎｇ （１．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＣｒｏｐＧｅｎｅｔｉｃＩｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔ，ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ； ２．ＳｔａｔｅＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＭｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｙｅａｓｔｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄａｓｓａｙｗａｓｃａｒｒｉｅｄｏｕｔｔｏｓｃｒｅｅｎｔｈｅｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｐｒｏｔｅｉｎｓｏｆＢｒａｓｓｉｃａｎａｐｕｓｈｅａｔ ｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎＢｎｐ２３ｕｓｉｎｇａｃｔｉｖａｔｏｒｄｏｍａｉｎ－ｃＤＮＡｌｉｂｒａｒｙｏｆＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓｔｈａｌｉａｎａｓｅｅｄｌｉｎｇｓ．３９ｐｏｓｉｔｉｖｅｃｌｏｎｅｓ ｗｅｒｅｉｓｏｌａｔｅｄ；ａｎｄａｍｏｎｇｔｈｅｍ，２ｃｌｏｎｅｓｗｅｒｅｅｎｃｏｄｅｄｂｙＡｒａｂｉｄｏｐｓｉｓＰＹＫ１０ｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ１（ＡｔＰＢＰ１）．Ｉｎｖｉｔｒｏ ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＡｔＰＢＰ１ａｎｄＢｎｐ２３ｗａｓｆｕｒｔｈｅｒｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔｔｉｎｇ．ＡｎｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＡｔＰＢＰ１ ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓｐｒｏｔｅｉｎＢｎＭＢＰ６（ｍｙｒｏｓａｓｅｂｉｎｄｉｎｇｐｒｏｔｅｉｎ６ｏｆＢ．ｎａｐｕｓ）ａｎｄＢｎｐ２３ｗａｓａｌｓｏｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄｂｙｙｅａｓｔｔｗｏ －ｈｙｂｒｉｄａｓｓａｙ． Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｙｅａｓｔｔｗｏ－ｈｙｂｒｉｄ；Ｂｎｐ２３；ＡｔＰＢＰ１；ＢｎＭＢＰ６ ［１］ 　　热激蛋白（Ｈｅａｔｓｈｏｃｋｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｈｓｐｓ）是生物体 些蛋白或者稳定它们的结构 。此复合体中， 在高温、干旱、缺氧等不良环境下诱导产生的一组应 Ｈｓｐ９０