丁香假单胞大豆致病变种两个iii 型效应因子的克隆及功能分析.pdf

微生物学通报 NOV 20, 2011, 38(11): 1679−1687 Microbiology China © 2011 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 研究报告 丁香假单胞大豆致病变种两个 III 型效应 因子的克隆及功能分析 张金梅 伍辉军 高学文* (南京农业大学 植物保护学院 农作物生物灾害综合治理教育部重点实验室 江苏 南京 210095) 摘 要: 为了研究III 型泌出效应因子在丁香假单胞大豆致病变种中的作用, 利用反向PCR 技术, 首次从丁香假单胞大豆致病变种全基因组中克隆得到两个效应因子HopAB1 和HopAF1 基因的同 源物, 分别命名为HopAB1s 和HopAF1s 。生物信息学分析表明, HopAB1s 基因全长是 1 572 bp, 编 码 523 个氨基酸; HopAF1s 基因全长是 855 bp, 编码 284 个氨基酸。即基因的登录号分别为 JF826562 和JF826563 。保守功能区预测显示HopAB1s 在N 末端包含一个E3 泛素连接酶功能区。 将这2 个基因克隆到PVX 二元表达载体并转化农杆菌, 利用农杆菌介导的瞬时侵染技术在本生烟 中表达, 发现 2 个效应因子均能抑制由鼠凋亡因子激发的细胞程序性死亡; 将烟草疫霉接种在表 达效应基因的区域, 发现效应因子能促进烟草疫霉侵染烟草, 因此本研究得到的两个效应因子是 免疫抑制因子, 为进一步研究该菌的致病机理奠定基础。 关键词: 丁香假单胞大豆致病变种, 效应因子, 反向PCR, 生物信息学, 免疫抑制因子 Cloning and functional analysis of two type III-secreted effectors in Pseudomonas syringae pv. glycinea ZHANG Jin-Mei WU Hui-Jun GAO Xue-Wen* (College of Plant Protection, Nanjing Agricultural University /Key Laboratory of Integrated Management of Crop Diseases and Pests, Ministry of Education, Nanjing 210095, China) Abstract: For studying the pathogenesis of the soybean pathogen Pseudomonas syringae pv. glycinea, two types of homologous genes of III-secreted effectors, named as HopAB1s and HopAF1s respectively, were first cloned from Pseudomonas syringae pv. glycinea by means of inverse PCR (iPCR) method. The ORF of HopAB1s gene contained 1 572 bp, encoding 523 amino acid residues. The ORF of Ho