抗除草剂转基因作物实时荧光定量pcr检测 - 应用与环境生物学报.pdf

2009 15 6 ): 866~870 2009-12-25 应用与环境生物学报 ， ( Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X DOI: 10.3724/SP.J.1145.2009.00866 抗除草剂转基因作物实时荧光定量PCR检测* 王恒波 陈如凯 陈平华** （福建农林大学农业部甘蔗遗传改良重点开放实验室 福州 350002） 摘 要 建立了一种以 SYBR Green I为结合染料、快速准确检测转抗除草剂基因成分的实时荧光定量PCR方法. 以转基 因大豆与转基因玉米标准品为材料，通过使用特异性引物和SYBR Green I结合染料实时荧光定量PCR技术，对转基因 农作物中外源抗除草剂基因进行了定量检测，绘制了两种基因扩增的标准曲线图，根据标准曲线方程计算外源基因 2 含量；并作了溶解曲线、检测方法检测灵敏度和精密度的分析. 研究发现，两者标准曲线方程线性关系良好，R 值分 别达到 0.993 9与0.992 4. 通过已知标准品进行验证，实测值与真值接近，与实际含量的相对偏差是 6.52%和7.90%. 结果 表明，SYBR Green I结合染料法完全可以用于转基因农作物定量PCR检测. 图5 表2 参 11 关键词 抗除草剂转基因作物；SYBR Green I荧光染料；实时荧光定量PCR ；溶解曲线；检测 CLC Q943.2 Detection of Genetically Modified Herbicide–tolerant Crops by Real-time Fluorescent Quantitative PCR Assay* WANG Hengbo, CHEN Rukai CHEN Pinghua** (Key Laboratory of Genetic Improvement for Sugarcane, Ministry of Agriculture, Sugarcane Research Institute of Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou 350002, China ) Abstract AA rara��idid and sensiand sensi��ii��ee SYBR Green I-based reaSYBR Green I-based rea��--��ii��ee PCRPCR ��ee��hodhod ��asas dede��ee��oo��eded ��oror ��uanuan��ii��aa��ii��ee dede��ee����ionion oo�� CP4- EPSPS and PAT genes from the genetically modified (GM) herbicide-tolerant crops. The target genes from transgenic soybean and maize references were amplified to make standard curves. The transgenic ratios were then calculated according to the s�andard C -copies linear graphs of these two genes. The reproducibil