靶向硫酸庆大霉素结合物的制备和免疫原性研究.pdfVIP

动物医学进展。2008，29(6)：32—34 Progress in Veterinary Medicine 靶向硫酸庆大霉素结合物的制备和免疫原性研究 刘 勇，董 伟，卓如意，唐 琴，孙志良 (湖南农业大学动物医学院，湖南长沙 410128) 摘 要：将硫酸庆大霉素与大肠埃希菌血清抗体用化学修饰荆进行偶联，再经适当的化学方法处理，按 照制剂学原理制备成靶向硫酸庆大霉素，经电镜检测，可以清楚的看到抗体球蛋白·上附着的硫酸庆大霉素药 物颗粒。应用间接ELISA法检测靶向硫酸庆大霉素结合物的免疫原性。结果表明，结合物存在微弱的免疫 原性，但与大肠埃希菌血清抗体相比，免疫原性已经大为减弱，说明靶向硫酸庆大霉素复合物中，化学修饰剂 不仅扮演偶联物的角色，还减弱了结合物中大肠埃希菌血清抗体的免疫原性，对靶向硫酸庆大霉素结合物的 药动学和药效学几乎无影响。 关键词：靶向硫酸庆大霉素；免疫原性；间接ELISA 中图分类号：$859．7 文献标识码：A 文章编号：1007—5038(2008)06—0032—03 靶向制剂亦称靶向给药系统(targeting drug 酸盐缓冲液：取24．3 mL 0．1 mol／L柠檬酸溶液， system，TDS or targeted drug delivery system， 25．7 mL 0．2 mol／L Na2 HP04·12H2 O，再加 50 TDDS)，是一类能使药物浓集定位于病变组织、器 mL ddH。0。柠檬酸溶液及配成的底物缓冲液不稳 官、细胞或细胞内结构的新型给药系统。靶向治疗 定，易形成沉淀，因此一次不宜配制过多)；OPD(邻 可使治疗部位的药物浓度明显提高，可减少用药量 苯二胺)底物(由于此底物对光敏感，必须现配现 并使治疗费用降低，减少药物对全身的毒副作 用)；反应终止液(准确量取浓 H。SO 10 mL溶于 用[1-4]。靶向制剂目前主要应用于人类治疗癌症药 80 mL DDW)。 物中，在兽医临床尚未见有关报道。通过将硫酸庆 1．1．2 实验动物 健康家兔9只，雌雄各半，体重 大霉素与大肠埃希菌血清抗体偶联[5-6]，制备出专一 1．50 kg～3．0 kg，购自湖南农业大学动物医学院。 针对大肠埃希菌的兽用靶向硫酸庆大霉素结合物， 1．1．3 实验仪器 电热恒温鼓风干燥箱，酶标板， 由大肠埃希菌血清抗体寻找和捕捉大肠埃希菌，由 酶标仪。 硫酸庆大霉素抑制和杀灭大肠埃希菌，使其对大肠 1．2 试验方法 埃希菌进行“精确打击”，以此增强硫酸庆大霉素的 1．2．1 靶向硫酸庆大霉素药液的制备 按适当比 抗菌作用[7]。靶向药物中存在血清抗体，故进行免 例称取化学修饰剂和硫酸庆大霉素原粉，加入到一 疫原性的测定，为该靶向药物应用于临床提供安全 定剂量的血清抗体中，再加生理盐水至45 mL，按无 性依据Is-9]。 菌操作法，在适宜的反应条件下搅拌，使之充分混 1 材料与方法 合、溶解，于4℃冰箱中放置24 h后，弃去上清液， 1．1 材料 将沉淀用450 mL生理盐水充分溶解，即制得靶向 1．1．1 药物与试剂 硫酸庆大霉素原粉(湖南金方 硫酸庆大霉素溶液，对其性状进行研究，进行电镜扫 堂药业有限公司提供)，大肠埃希菌血清抗体(自制， 描，然后将制备的靶向药物放入冰箱冷藏备用。 用大肠埃希菌灭活疫苗免疫家兔制得)，酶标抗体 1．2．2 免疫原性检测 参照文献[10—11]选取9只 (北京鼎国生物技术发展中心，批号Y2300140)，包 家兔分为3组，一组注射靶向药物结合物水溶液，另 被液(碳酸盐缓冲溶液)；封闭液(i00 mL／L小牛血 外一组注射免疫大肠埃希菌血清抗体溶液，空白组 清PBS溶液，调整 pH至 7．2)，洗涤液(PBST： 注射生理盐水。在家兔背部皮内接种免疫1次，剂 0．05 Tween-20的PBS)，底物溶液(磷酸盐一柠檬 量为1 mL，分点注射，接种家兔在适宜隔离条件下 收稿日期