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以plk1 pbd 为靶点的小分子抑制剂筛选及其抗癌活性研究
中国医药生物技术 2015 年4 月第10 卷第2 期 Chin Med Biotechnol, April 2015, Vol. 10, No. 2 125
DOI:10.3969/cmba.j.issn.1673-713X.2015.02.006 ·论著·
以PLK1 PBD 为靶点的小分子抑制剂
筛选及其抗癌活性研究
张智慧* *
,张晶,刘伟,陈云雨,司书毅,王艳宏
【摘要】 (ATP-binding pocket )进行设计的[10-11],但 ATP 结
目的 利用荧光偏振模型进行 PLK1 PBD 抑制剂的高通量 合区的结构保守性使其对其他激酶的抑制作用难
筛选,并对阳性化合 6143D7 的抗癌效果进行体外评价。 以区别,并且还容易与类似的药物有交叉耐药性。
方法 采用噻唑蓝比色法检测初筛阳性化合物对不同细胞 所以,为寻求更高效、专一的 PLK1 抑制剂,PBD1
系增殖的影响;流式细胞术检测化合物对细胞周期以及凋亡 成为了近年来寻找高选择性 PLK1 抑制剂的新靶
率的影响;分子对接检测化合物与 PLK1 PBD 结构域的亲 点[12-19] 。
和性。 荧光偏振方法是 Perrin[20]于 1926 年提出的
结果 利用荧光偏振模型得到的阳性化合物 6143D7 经噻 理论,通过检测荧光标记的分子或者固有荧光分子
唑蓝比色法检测显示能抑制癌细胞的增殖;流式细胞仪检测 的荧光强弱变化来研究分子间相互作用,能够直
显示该化合物加药组 G2/M 期细胞比例高于对照组并能促 接、近乎瞬时地检测结合于自由示踪剂分子的比
进细胞凋亡;分子对接结果表明化合物与 PLK1 PBD 结构 值。当小的荧光分子在平面极化光的激发下,荧光
域的亲和性良好。 寿命内(激发与发射之间的时差)小分子在溶液中
的旋转速度快,所形成的发射光大部分是去极化
结论 该化合物通过抑制 PLK1 PBD 结构域的活性发挥抗
的;但是,当荧光分子结合到大分子后,它的有效
癌作用,有望成为靶向 PLK1 的抗肿瘤先导化合物。
体积增大,旋转减慢,在与激发光相同平面上的发
【关键词】蛋白质丝氨酸苏氨酸激酶; 药物筛选试验,
射光增多,去极化减弱,偏振增强。因此,荧光分
抗肿瘤; 荧光偏振; polo 样激酶 1 抑制剂
子在自由状态下偏振值较低,而在结合状态偏振值
中国医药生物技术, 2015, 10(2):125-130
较高,检测到的偏振值是这两个值的加权平均值,
从而提供了直接检测荧光分子结合到受体比值的
激酶是调控正常细胞和肿瘤细胞增殖的主要
方法[21-24] 。这种技术被广泛应用于临床和生物医学
蛋白,polo 样激酶(polo-like kinases ,PLKs )是一
类结构和功能均高度保守的丝/苏氨酸蛋白激酶[1-2], 领域,包括某些疾病的诊断和监测治疗药物在体内
的水平,进而用于高通量筛选,为药物的筛选提供
已经报道的 PLKs (PLK1 、PLK2 、PLK3 、PLK4 )
了更加灵敏、简易、快速的方法。
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