响应面法在紫杉醇产生菌发酵前体优化中的应用 - 生物通.pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（１１）：６６～７２ 响应面法在紫杉醇产生菌发酵前体优化中的应用 代文亮　程　龙　陶文沂 （江南大学工业生物技术教育部重点实验室　无锡　２１４１２２） 摘要　采用响应面法对美丽镰刀菌（ＦｕｓａｒｉｕｍｍａｉｒｅｉＫ１７８）发酵合成紫杉醇途径中一些可能的前 体进行优化研究。首先采用ＰｌａｃｋｅｔｔＢｕｒｍａｎ法对８个因素进行了筛选，结果表明，苯丙氨酸，苯甲 酸钠和乙酸钠三个因素对紫杉醇产量影响较大。在此基础上，再通过 ＢｏｘＢｅｈｎｋｅｎ设计，利用 ＤｅｓｉｇｎＥｘｐｅｒｔ软件进行二次回归分析，得到各因素的最佳浓度为：苯丙氨酸２．８ｍｇ／Ｌ，苯甲酸钠 ３１．８ｍｇ／Ｌ，乙酸钠３．３ｇ／Ｌ。在优化条件下紫杉醇的产量达到２４２．６ｇ／Ｌ，较前体单因素实验最高 μ 值提高１５．６％。 关键词　ＦｕｓａｒｉｕｍｍａｉｒｅｉＫ１７８　紫杉醇　响应面法　前体　优化 中图分类号　Ｑ８１３．１ 　　紫杉醇（ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ，商品名Ｔａｘｏｌ）是一种二萜类衍 杉醇产生菌ＨＱＤ３３产紫杉醇的影响，发现它们之间的 生物，是具有独特抗癌机制的天然产物，分子式为 Ｃ 协同作用对提高紫杉醇产量有显著影响，紫杉醇产量 ４７ ［１］ ［９］ 达到２０３．６５６ｇ／Ｌ；张亚妮等 在Ｔ 菌发酵液中单一 Ｈ ＮＯ ，最初从红豆杉植物中分离得到 。Ｓｃｈｉｆｆ μ １４ ５１ １４ ［２］ 添加苯丙氨酸，紫杉醇产量从约９０ｇ／Ｌ增加到１４６．４ 等 随后证实紫杉醇具有独特的抗癌机制。 μ ［１０］ 　　能合成紫杉醇的红豆杉内生真菌的发现，是紫杉 μｇ／Ｌ；刘晓兰等 在培养基中分别添加苯丙氨酸，醋 ［３］ 酸钠，酪氨酸等前体，以特征性蓝色斑点为考察指标， 醇资源研究的重要进展。自从Ｓｔｉｅｒｌｅ等 证明短叶红 豆杉的内生真菌可以产生抗癌药物紫杉醇，对植物内 确定前体最佳浓度，经培养基和培养条件优化后，紫杉 生真菌的研究更加引人注目。我国学者也发现了多种 醇产量达４４８．５２ｇ／Ｌ。这些方法仅能比较各因素已选 μ 产紫杉醇的内生真菌［４，５］，本实验室研究人员也从中 定水平的影响，不能提供未考察区域的信息，不能进行 国南方红豆杉中分离到一株产紫杉醇内生真菌 预报和控制，亦不能直观反映出前体物之间对紫杉醇 ［６］ （Ｆｕｓａｒｉｕｍｍａｉｒｅｉ），并获得国家专利 。 合成交互作用的显著程度。 　　紫杉醇的生物合成途径是在合成三环二萜骨架 　　 响应面分析法 （ｒｅｓｐｏｎｓｅｓｕｒｆａｃｅｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ， 后，引进侧基进一步形成Ｂａｃｃａｔｉｎ ，它是紫杉醇合成 Ⅲ ＲＳＭ）是一种寻找多因素系统中最佳条件的数学统计 的直接前体，Ｂａｃｃａｔｉｎ 上 Ｃ１３位羟基与侧链产生酯 Ⅲ 方法。通过局部实验回归拟合因素与结果间的全局函