抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体制备、鉴定和在侧向免疫层析方法中 .pdf

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１３，３３（１）：７２７８ 抗心型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体制备、鉴定 和在侧向免疫层析方法中的应用 １，２ ２ ２ ２ ２ ２ ２ 康可人 　吴培钿 　李悦琳 　黄绮玲 　李高辉 　唐时幸 　王继华 （１华南理工大学生物科学与工程学院　广州　５１０６６０） （２自检型快速诊断国家地方联合工程实验室 广州万孚生物技术股份有限公司　广州　５１０６６３） 摘要　目的：制备抗心型脂肪酸结合蛋白（ＨＦＡＢＰ）单克隆抗体（ｍＡｂ），并建立侧向免疫层析方 法检测血浆中ＨＦＡＢＰ。方法：用ＨＦＡＢＰ蛋白免疫纯系Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，采用杂交瘤技术建立能稳 定分泌抗人ＨＦＡＢＰ的单克隆杂交瘤细胞株。常规制备腹水，纯化后得到特异性抗ＨＦＡＢＰ单克 隆抗体，进行效价、特异性、亲和力的鉴定分析，并在 ＥＬＩＳＡ平台进行抗体配对，用所筛选到的抗 体对初步建立了检测ＨＦＡＢＰ的侧向免疫层析方法。结果：成功获得 １２株稳定分泌抗体的阳性 细胞株，并筛选出能相互配对，并应用于侧向免疫层析平台的抗体３Ｄ１和５Ｆ４，检测临床样品与对 照试剂比较总符合率为１００％。结论：筛选能稳定分泌抗体的细胞株，配对抗体应用于侧向免疫 层析检测方法中，能快速、特异、灵敏的检测出临床样品中ＨＦＡＢＰ，为临床应用快速检测ＨＦＡＢＰ 指标提供了方法和关键材料。 关键词　ＨＦＡＢＰ　单克隆抗体　ＰＯＣＴ　免疫层析 中图分类号　Ｑ５１１ 　　自Ｒ．Ｋ．Ｏｃｋｎｅｒ等人 １９７２年发现脂肪酸结合蛋 用；ＥＬＩＳＡ操作繁琐，不适合单个样品的检测；免疫比浊 白以来，人们陆续分离并鉴定了９种不同类型的脂肪 法借助临床全自动免疫比浊分析仪，自动化程度高，但 ［１２］ 酸结合蛋白 ，不同型ＦＡＢＰ的氨基酸序列的同源性 对仪器设备要求高，需要专业人士操作，因此这些方法 为３８％ ～７０％。ＨＦＡＢＰ是一种可溶性蛋白，分子量 在简便、快捷的应用模式上，均存在不可忽略的弊端， 为１４～１５ｋＤａ，大量存在于心肌细胞质中，占胞质蛋白 尤其不适合急诊及现场检验。胶体金免疫层析技术属 的 ［３５］ 于即时检测（ １５％ 。正常状况下，血液中不含或仅含极少量 ｐｏｉｎｔｏｆｃａｒｅｔｅｓｔｉｎｇ，ＰＯＣＴ）领域中的成熟 ＨＦＡＢＰ，血浆参照浓度为（１．１～２．１）ｇ／Ｌ，上限为 技术，能快速、灵敏、简捷的实现指标的定性检测，而且 μ ５ｇ／Ｌ。当心肌细胞受损时，ＨＦＡＢＰ由于分子量小，可 此技术正逐渐向定量检测发展，尤其适合于单样品的 μ 迅速释放入血或尿液中，因此在早期诊断ＡＭＩ及评估 急诊 检验。抗 ＨＦＡＢＰ单 克 隆抗 体 （ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ 心肌梗死面积大小，监测 ＡＭＩ的复发，监测 ＡＭＩ后再 ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｍＡｂ）是诊断试剂盒中最关键的原材料，无论 ［６８］ 灌注及预后评估中均具有重要价值 。 在何种免疫学的检测方法中均有使用，其亲合力和特 　　目前，血浆ＨＦＡＢＰ的临床检测主要有放射免疫分 异性直接决定了ＨＦＡＢＰ检测试剂盒临床应用结果的 析（ＲＩＡ）、酶联免疫分析（ＥＬＩＳＡ）、免疫比浊法等方法。 准确性。商品化ｍＡｂ在国外已经制备成功，国内尚无 ＲＩＡ检测步骤繁琐，且存在放射性污染，不适合临床应 此ｍＡｂ能成功用于临床诊断。本研究制备ＨＦＡＢＰ的 收稿日期：２０１２１０２８　　修回日期：２０１２１１１３ ｍＡｂ，旨在建立检测ＨＦＡＢＰ的侧向免疫层析法和免疫 卫生部《重组蛋白和抗体库研制平台》资助项目（２０１１ＺＸ０９５０６