亲和色谱法筛选中药中血管紧张素转化酶抑制剂 - science china press.pdf

中国科学 B 辑 :化学 2009 年 第 39 卷 第 8 期 : 760 ~ 766 SCIENCE IN CHINA PRESS 亲和色谱法筛选中药中血管紧张素转化酶抑制剂 ① ② ② ② ①②* 黄燕 , 田清清 , 李谭瑶 , 陈波 , 姚守拙 ① 湖南大学化学生物传感与计量学国家重点实验室, 长沙 410082; ② 湖南师范大学化学生物学及中药分析教育部重点实验室, 长沙 410081 * 通讯作者, E-mail: szyao@ 收稿日期：2009-06-11; 接受日期：2009-06-21 摘要 以壳聚糖微球为载体、戊二醛(glutaraldehyde, GA)为交联剂对血管紧张素转 关键词 化酶(Angiotensin converting enzyme, ACE)进行固定化. 用固化的ACE 作为亲和介 中药 质, 利用血管紧张素转化酶抑制剂(Angiotensin converting enzyme inhibitor, ACEI)与 血管紧张素转化酶抑制剂 ACE 之间的亲和作用, 结合高效液相色谱对亲和前后的体系进行检测, 比较两者各 筛选 亲和色谱 组分色谱峰的差异, 以此实现快速筛选复杂体系中的 ACE 抑制剂. 应用赖诺普利 固定化酶 (Lisinopril) 、九肽抑制剂、依那普利(Enalapril) 、培哚普利(Perindopril) 、卡托普利 (Captopril)等已上市的ACEI 对方法进行验证, 反映方法具有高度选择性. 将方法应 用于中药地龙及山楂筛选, 发现共有 5 个组分与 ACE 有亲和作用, 并且都能抑制 ACE 酶活性, 它们对酶活性抑制的IC50 值在0.45~4.62 μg/mL 范围. 通过对亲和方 法重现性考察, 6 次测定的相对标准偏差小于 1%, 说明方法可靠. 提出的亲和色谱- 色谱指纹差异法非常适合于从中药及天然产物等复杂混合物库中快速筛选靶点活性 物质. 1 引言 zyme, ACE) 是一种膜固定的二肽羧基金属蛋白酶, 中药的有效性毋庸置疑. 然而在近现代主流药 在体内它能将血管紧张素 I(十肽, Ang I)水解成血管 学中, 中药仅扮演着配角角色, 根本原因在于药效物 紧张素 II(八肽, Ang II), 而使得血管收缩, 引起血压 质基础不明. 中药药效物质的阐明对于中药的质量 升高. 目前, 血管紧张素转化酶抑制剂(Angiotensin 控制、新药研发及毒性控制有着重要意义[1~4]. 在高 converting enzyme inhibitor, ACEI)是一类极为重要的 血压治疗中, 目前已知的具降压作用的中药有 70 多 高血压治疗药物. 但人工合成的 ACEI 存在一些不良 种. 其中天麻、钩藤、菊花等可有效改善眩晕; 柴胡、 反应, 如咳嗽、味觉功能紊乱及皮疹等. 因此从天然 龙胆草、地龙等可缓解急躁易怒; 山楂、五味子、柏 产物及中草药中筛选新的ACEI 将为高血压的治疗提 子仁能改善心悸失眠等. 尽管作用各不相同, 但都有 供新的药物. 明确的降压作用. 探寻这些中药中的有效物质对于 酶抑制剂的筛选方法主要被划分为两类：均相溶 合理解释中药的作用机理、开发新型抗高血压药物有 液酶法和固相酶法. 前者以溶液酶作为酶源,