离子交换层析复性重组人y一干扰素折叠二聚体的形成.pdf

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离子交换层析复性重组人y一干扰素折叠二聚体的形成

浙江大学学报(农业与生命科学版)32(1):101~105,2006 Journalof LifeSci.) ZhejiangUniversity(Agric.8L 文章编号:1008-9209(2006)01一0101一05 离子交换层析复性重组人Y一干扰素折叠二聚体的形成 靳挺1’2,关怡新1,姚善泾1 (1.浙江大学化学工程与生物工程学系,浙江杭州310027;2.浙江大学宁波理工学院生物与化学工程分院,浙江宁波315100) Fast 摘要:SPSepharoseFlow离子交换层析柱作为蛋白质复性系统,采用尿素梯度法进行重组人r 干扰素包涵体蛋白质的复性实验.结果表明,尿素梯度离子交换层析法能有效地复性重组人r干扰素 包涵体,复性后的重组人r干扰素的纯度迭95%,蛋白收率达54%,比活为7.5×105 IU.mg~.以 Superdex75凝胶作为体积排阻层析介质,对离子交换层析复性的样品进行分析,表明离子交换层析复 性的样品中没有重组人r干扰素聚集体存在.荧光光谱分析表明重折叠的重组人r干扰素的构象接近 于其天然二聚体构象. 关键词:重组人r干扰素;包涵体;复性;离子交换层析;荧光光谱分析 中图分类号:Q511 文献标识码:A JIN Yi—xinl,YAO ChemicalandBiochemical Tin91一,GUAN Shan-jin91(j.Departmentof 310027, Biochemical Engineering,ZhejiangUniversity,HangzhouChina;2.Collegeof Institute 315100,China) Engineering,NingboofTechnology,Zh巧iangUniversity,Ningbo Formationofdimersin ofrecombinanthuman refolding interferon-yion-exchange by chromatography. of JournalZhejiangUniversity(Agric.&LifeSci.),2006,32(1):101-105 Abstract:The was theconcentrationofureainthe refoldingprocessperformedbygraduallydecreasing after buffer thedenaturedrhIFN一7 hadbeenboundontothe SP Fast proteins ion-exchangegel Sepharose Flow.Resultsshowedthatthedenatured wasrefolded rhIFN一_y efficientlybyion-exchange withaurea andthe oftherefolded wasto chromatographygradient purity rhlFN-yup 95%.The protein was54%

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