二种多管水母光蛋白基因的分离、表达及生物活性初步研究.pdf

第 26 卷 　第 4 期 海 　　洋 　　学 　　报 Vol. 26 , No. 4 2004 年 7 月 ACTA OCEANOLO GICA SIN ICA J uly 2004 二种多管水母光蛋白基因的分离、表达及 生物活性初步研究 1 1 1 1 1 1 1 罗文新 ,张　军 ,李少伟 ,程　通 ,陈　敏 ,李少菁 ,夏宁邵 ( 1. 厦门大学 细胞生物学与肿瘤细胞工程教育部重点实验室 , 福建 厦门 361005 ; 2 厦门大学 海洋与环境学院 , 福建 厦门 361005) 摘要 : 分别从厦门东海域的大型多管水母和细小多管水母中分离到了新的光蛋白基 因aeqxm 和 aeqxxm ,并在大肠杆菌中进行了表达. aeqxm 和 aeqxxm DNA 序列的编 码区总长均为 585 bp , 无内含子序列 ,推导的氨基酸序列总长均为 195 个氨基酸. aeqxm ,aeqxxm DNA 和 AEVAQ440X cDNA 之间的核苷酸序列同源性分别为 807 % ,851 % ,aeqxm 和 aeqxxm DNA 的核苷酸序列同源性为 872 %. 原光蛋白 apoaeqxm, apoaeqxxm 与 AEVAQ440X 编码的氨基酸序列之间的同源性分别为 847 % ,842 % ,apoaeqxm 和 apoaeqxxm 的氨基酸序列之间的同源性为 94 4 %. 分 别将 aeqxm 和 aeqxxm 基因克隆至p TO - T7 表达载体 ,apoaeqxm ,apoaeqxxm 在大肠 杆菌中的表达量都达到 40 %左右. 取菌体超声上清与腔肠动物荧光素f 、巯基乙醇混 合再生后 ,加入 CaCl2 , 用荧光全谱仪检测到 470 nm 处的瞬时发光 , 表明表达的 apoaeqxm ,apoaeqxxm 具有正常的生物学功能. 关键词 : 大型多管水母 ; 细小多管水母 ; 光蛋白基因 ; 表达 + ( ) 中图分类号: Q959131 5 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 0253 - 4193 2004 04 - 0110 - 08 1 　引言 水母光蛋白 ( aequorin) 是一种生物发光蛋白 , 分离自发光水母 , 由 22 KD 的原光蛋白 ( ) ( ) 2 + apoaequorin 、分子氧和腔肠动物荧光素 coelenterazine 组成. 当3 个 Ca 与之结合时coelen terazine 即氧化为 coelenteramide ,并释放出 CO2 发射蓝光. 光蛋白对 Ca2 + 具有高度敏感性和 收稿日期 : 2001 - 04 - 16 ; 修订日期 : 2001 - 08 - 13. ( ) ( ) 基金项目 : 国家海洋“863 ”高科技计划领域青年基金资助项目 819 - Q - 06 ; 国家自然科学基金资助项目 ;