HBsAg的单克隆抗体制备、表位分型及其应用分析.pdfVIP

摘要 摘要 临床上，通过检测HBV血清标志物来辅助判断HBV感染与否，评价预后，治疗方案 和药物反应等。HBsAg是感染HBV后最早出现在血液中的标志物之一，通常在肝脏组织 产生生化指标异常或表现出黄疸症状前2．8周即可在血液中检测至IJHBsAg。因此，在血 编码，根据HBsAg表面抗原决定簇的不同，可以将其分为不同亚型，主要包括：adw， r^l清型的 亚型具有明显的地理分布特点，并且与疾病的发生发展呈一定相关性，HBsAg 临床意义也是当前HBV研究的热点之一。在今后的HBV检测项目中，如果能够同时对 HBsAg_亚型进行鉴定，将为疾病的治疗方案和预后判断提供非常有价值的参考。共同决 定簇“a”存在于所有HBsAg中，因此成为免疫检测和疫苗设计的最佳靶点。 具有成本低，操作简单，适用于大规模筛选等优点，是目前最为常用的检测方法。近年 来，相继有新的检测方法与技术问世，包括微粒子酶免疫分析，化学发光免疫分析等方 法。总体而言，特异性好且敏感性高的HBsAg单克隆抗体始终是各种方法与技术发展 的基础与前提。 本研究着眼于我国HBsAg检测水平与目前存在的问题，探讨了高敏感性高特异性 要包括以下三个方面的内容： ad免疫两组Balb／C小鼠，3次免疫之后检N 抗体效价。选择血清抗体效价较高的小鼠作为脾细胞来源，利用PEG作为融合剂将脾 细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合。经筛选获得阳性杂交瘤细胞，利用有限稀释法进一步分 选出分泌单一表位抗体的杂交瘤细胞，最终获得5株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株。对 异性抗体3株，分别为命名为}}3．11．2，群3．16．1和柏．2．2。 2．共同决定簇“a，’特异性抗体的功能分析与应用研究。对2株亲和力较好的抗体进 ELISA方法对各抗体进行表位鉴定。以特异性强、亲和力好为原则从中选择出一组不同 表位抗体，通过优化参数，确立了一个最佳的HBsAg检测体系：0．8pg／mL群6．2．2包 对照品作为样本，检测本体系的有效性和灵敏性。进一步利用优选的一对撑6．2．2和撑3． 并且与临床医院应用的检测方法进行比较，本研究中建立的体系表现出较好的实际应用 能力。 3．初步探索HBsAg血清型单克隆抗体的制备。在前期共同决定簇“a’特异性单抗 HBsAg-ad抗原免疫筛选到共同决定簇…a’特异性抗体的同时，还有一部分抗体能且仅能 隆抗体。 关键词 乙肝病毒表面抗原，单克隆抗体，酶联免疫吸附分析 II Abstract HBV the markersareusedinclinical of and of Serological practiceprognosisdisgnosis HBV infectionand beusedforthe of Bsurface may guidanceHepatitis therapy．Hepatitis oneofthemostcommonHBVinfectiousmarkers antigen(HBsAg)is intheclinicalfield．耶1e markerbe 2-8 coulddetectedin weeksfromtheHBVinfectiontotheonset andthe ofjaundice manifestationofliver is