·论着· 铁蛋白轻链的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备.pdf

第 二 军 医 大 学 学 报 · · ； （ ） １１８０ ２００７Ｎｏｖ２８ １１ 　 　 ＡｃａｄＪ Ｓｅｃ Ｍｉｌ Ｍｅｄ Ｕｎｉｖ ·论 著· 　 铁蛋白轻链的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备 金 蕾，张慧珍，杨继要，赵向锋，王 琳，吴逸明 　 　 （郑州大学公共卫生学院职业卫生与职业医学教研室，郑州 ） ４５０００１ ［摘要］ 构建 的原核表达载体，获得 纯化蛋白，制备抗体，为研究其生物学作用奠定基础。 采用基因重 目的： ＦＴＬ ＦＴＬ 方法： 　 组技术将 扩增的 基因产物与原核表达载体 （ ）连接，转化入大肠杆菌 （ ），通过 、单双酶切及测序 ＰＣＲ ＦＴＬ ＥＴ３０ａ ＋ ＢＬ２１ ＤＥ３ ＰＣＲ ｐ 鉴定构建结果，用 诱导蛋白表达，将融合蛋白纯化后，免疫日本大白兔，制备 多抗，采用 印迹法检验抗体特异 ＩＰＴＧ ＦＴＬ Ｗｅｓｔｅｒｎ 性。 成功地构建了 的原核表达载体，经大肠杆菌中诱导表达、镍亲和层析柱纯化，得到较纯的相对分子质量约 结果： ＦＴＬ ２５８００ 的融合蛋白，免疫日本大白兔后得到多抗血清， 印迹结果显示此多克隆抗体与 蛋白特异性结合。 本研究获得 Ｗｅｓｔｅｒｎ ＦＴＬ 结论： ＦＴＬ纯化蛋白，制备了ＦＴＬ多克隆抗体，为进一步研究ＦＴＬ的作用机制及其在肺癌组织中的表达情况奠定了基础。 ［关键词］ 铁蛋白；原核表达；重组融合蛋白质类；色谱法，亲和；抗体 　 ［中图分类号］ ［文献标识码］ ［文章编号］ （ ） Ｑ７８ Ａ ０２５８８７９Ｘ ２００７ １１１１８００４ 　 　　　 　 　　　 　 ， Ｐｒｏｋａｒｏｔｉｃｅｘ ｒｅｓｓｉｏｎ ｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄ ｏｌｃｌｏｎａｌａｎｔｉｂｏｄ ｒｅａｒａｔｉｏｎｏｆＦｅｒｒｉｔｉｎｌｉｈｔｃｈａｉｎ ｙ