peg化重组人促红素质量控制方法和标准研究.pdf

药物分析杂志ChinJPharmAnal2012，32(4) ★ 标 准 研 讨 ★ PEG化重组人促红素质量控制方法和标准研究 周勇，王丽，于传飞，杨鹏云，王箐舟，侯继锋，王军志 (中国食品药品检定研究院，北京 lOOO50) 摘要 目的：建立 PEG化重组人促红素质量控制方法和质量标准。方法：用正常小鼠网织红细胞计数法测定体内生物学活 性，使用 iCE毛细管等电聚焦电泳分析异构体 ，用离子色谱确定Ⅳ一糖链指纹图谱 ，反相 HPLC进行 Lys—C蛋白内切酶酶切 的肽图分析以及纯度测定。其余检测项 目按2010年版中国药典三部方法进行。结果：建立的方法经过比较和对PEG化重组 人促红素的检测，结果稳定可靠 ，重复性好 ，各指标符合 《人用重组 DNA制品质量控制技术指导原则》和 2010年版中国药典 三部的要求。结论：本研究建立了一套完善的PEG化重组人促红素质量控制体系。 关键词：PEG化重组人促红素；活性 ；红细胞计数法；毛细管等电聚焦电泳；离子色谱；反相高效液相；糖链指纹图谱 ；肽图分 析；纯度测定 中图分类号：R917 文献标识码：A 文章编号：0254—1793(2012)04—0661—04 Studyon methodsandrequirementsforquality controlofPegylatedErythropoietin(PEG—EPO) ZHOU Yong，WANG Li，YU Chuan—fei，YANG Peng—yun， WANGQing—zhou，HOUji—feng，WANGJun—zhi (NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing100050，China) Abstract Objective：ToestablishmethodsandrequirementsforthequalitycontrolofPEG—EPO．Methods：Invi— UObioactivityofPEG —EPO wasdeterminedbythecountofreticulocytesin normocythaemicmice．Isoformswere analyzedbycIEF．OligosaccharidefingerprintprofilingwasdeterminedbyHPAEC．Purityandpeptidemappingwere analyzedbyreverseHPLC system．OtherroutinetestswereallcarriedoutaccordingtotheChinesepharmacopoeia (volumellI，2010edition)．Results：TherequirementsandmethodsforthequalitycontrolofPEG—EPOhavebeen established．Theresultsofalltestswerereliableandreproducible，andcompliedwith theChinesepharmacopoeia andguidelinesofrthequalitycontrolofrecombinantDNA products．Conclusion：Themethodsandrequirementsofr PEG —EPO showedthecharacteristicsofassuringtheproductssafetyandefficacy，whichcanbeusedofrthequality controlofPEG —EPO． Keywords：pegy—lated erythropoietin；bioactivity；erythrometry；capillaryisoelectricfocusingelectrophoresis；ion chromatography；RP—HPLC；oligosaccharidefingerprint；peptidemapping；purityassay 重组人促红素 (rHuEPO)是利用基因工程技术， 与rHuEPO分子的自由氨基形成稳定的共