甜味蛋白brazzein 基因酵母表达系统的建立ξ - 吉林农业大学学报.pdf

吉林农业大学学报 　2010 ,32 ( 1) :43～46 http :/ / x uebao. j lau . edu . cn J ournal of J ilin A gricultural University Email :j lndxb @vip . sina . com 甜味蛋白Brazz ein 基因酵母表达系统的建立 史 　勇, 张明军, 张 　英, 李 　莉, 汤 　丹, 刘松财 吉林大学畜牧兽医学院 , 长春 130062 摘 　要 : 根据甜味蛋白Brazzein 基因成熟区的氨基酸序列 ,结合毕赤酵母的密码子偏爱性以及 Brazzein 蛋白质 ( 结构的相关研究 ,对甜味蛋白Brazzein 基因进行改造 ,使表达的目的蛋白中包含 3 个突变氨基酸 29Asp →Lys , ) ( ) 31His →Ala ,41Glu →Lys 。采用重叠 PCR SOE - PCR 合成 目的基因并克隆到 pMD18T 载体 ,经测序鉴定 ,序列 α 正确的质粒用 EcoR Ⅰ和 X ba Ⅰ双酶切 。将回收得到的目的基因连接到经同样双酶切处理的p GAPZ A 载体 α α 上 ,经 PCR 、酶切和测序鉴定 ,证明已成功构建 p GAPZ ABra 真核表达载体 。将构建好的重组载体 p GAPZ A Bra 用 Avr Ⅱ线性化 , 电转进入巴斯德毕赤酵母中。筛选 ZeocinTM 阳性克隆菌 ,进行蛋白表达 ,SDS - PAGE 结果 表明蛋白表达成功 。 α 关键词 : 甜味蛋白; Brazzein 基因; p GAPZ ABra ; 巴斯德毕赤酵母 ( ) 中图分类号 : Q786 　　　文献标识码 : A 　　　文章编号 : 2010 Construction of Yeast Expression System of Sweet Protein Brazzein SHI Yong , ZHAN G Mingj un , ZHAN G Ying , LI Li , TAN G Dan , LIU Songcai College of A nimal Science and Veterinary Medicine , J ilin University , Changchun 130062 , China Ab stract : According to amino acid sequences of the sweet protein Brazzein , the biased codons of Pichia pastoris yeast and the latest research advances about the protein structure