金属螯合介质 - 中科森辉微球技术（苏州）.doc

金属螯合介质（Ni-IDA QZT 6FF）产品说明书 1. 产品简介 金属螯合亲和层析，又称固定化金属离子亲和层析（Immobilized metal ion affinity chromatography, IMAC）。该法利用蛋白质表面的某些氨基酸（如组氨酸、色氨酸、半胱氨酸等）和金属离子（Cu2+、Zn2+、Ni2+等过渡金属离子）发生特殊的相互作用的原理，从而实现蛋白质的分离。金属螯合高流速琼脂糖介质（Ni-IDA QZT 6FF）是将亚氨基二乙酸（IDA）键合在高流速琼脂糖微球上，并螯合金属离子Ni2+而形成的一种亲和层析介质。影响蛋白质/多肽与金属离子鳌合力大小的因素主要是蛋白质表面可结合的氨基酸（种类、数目和分布）、金属离子的种类和密度、层析条件（pH、盐的种类和浓度、添加剂等）。IMAC具有吸附容量大、选择性好、分辨率高、易于再生、成本较低等优点，广泛用于生物制药和生物工程下游蛋白质、核酸及多肽的分离纯化，尤其是组氨酸标记蛋白质的分离纯化。 2. 产品特性 Ni-IDA QZT 6FF亲和介质具有良好的稳定性、生物相容性和溶剂相容性，这不仅有利于保持产品的生物活性和提高产品的收率，还有利于扩大层析操作条件的选择范围。Ni-IDA QZT 6FF亲和介质的理化性质和溶剂相容性分别如表1和表2所示。 表1. Ni-IDA QZT 6FF的理化性质及特征参数 参数 指标 基质 6%交联琼脂糖 配基 -N(CH2COOH)2 形状 球形 μm (45-165) 金属离子 ~40 μmol Ni2+/ml wet gel 动态载量a ~25-30 mg His-Tagged LDH/ml wet gel 推荐流速b 5-10 ml/min (150-300 cm/h) 最高流速 20 ml/min (600 cm/h) 最高耐压 0.3 MPa (3 bar) 化学稳定性 M HCl、0.1 M NaOH°C, 7天）；1 M NaOH、70%乙酸（12 h）；30%异丙醇（30 min）；2% SDS（1 h） 避免使用的试剂 螯合剂，如EDTA、EGTA、柠檬酸等 pH稳定性c 2-14（短）；312（长） 20%乙醇4-30 oC 动态载量a： 样品：平衡缓冲液中含1mg/ml histidine-tagged LDH（Mr 140000）； 计算方法：根据10%穿透点计算介质动态载量（QB, 10%）； 柱体积：5 ml（6.37*1.0 cm I.D.）； 流速：2.5 ml/min； 平衡缓冲液：20mM PB + 0.1M NaCl + 50 mM 咪唑, pH 7.4； 洗脱缓冲液：20mM PB + 0.1M NaCl + 0.5 M 咪唑, pH 7.4； 注意：动态载量与蛋白种类和操作条件密切相关。 b：流动相为纯水，室温下操作，柱尺寸为10.0*1.6 cm I.D.，CV=20.0 ml。 c：未螯合Ni2+的介质。 表2 Ni-IDA QZT 6FF和特定浓度试剂的相容性 试剂类型 试剂名称及浓度 还原试剂 10 mM β-巯基乙醇 变性剂 8 M 尿素、6 M 盐酸胍 去污剂 2%Triton X-100、2%Tween-20、2%NP-40、2%胆酸盐、1%CHAPS 缓冲液组分 50 mM 磷酸钠, pH7.4、100 mM Tris-HCl，pH7.4、100 mM Tris-acetate, pH7.4、100 mM HEPES，pH7.4、100 mM MOPS，pH7.4、100 mM 醋酸钠，pH7.4 其它试剂 20%乙醇、50%甘油、0.1 M Na2SO4、1.5 M NaCl、1 mM EDTA、60 mM 醋酸 3. 应用 Ni-IDA QZT 6FF广泛用于蛋白质、核酸及多肽，尤其是组氨酸标记蛋白质的分离纯化。金属螯合层析可采用重力柱、蠕动泵和层析系统等模式进行操作。以层析系统操作模式为例，层析操作通常包括装柱、螯合金属离子、平衡、进料、淋洗、洗脱、再生等步骤（具体操作条件以10.0 * 1.6 cm I.D.，CV=20.0 ml层析柱为例）。 3.1 装柱 （1）Ni-IDA QZT 6FF介质通常在4 oC下保存于20%乙醇中，使用前先取出适量（22 ml介质）介质放置于烧杯中，用纯水置换掉20%的乙醇溶液，静置沉降后倒掉部分上清至凝胶浓度约为60%（匀浆液体积约为36 ml），搅拌均匀后备用（匀浆液温