三苯氧胺对抑制胰腺癌细胞生长作用的实验分析.pdf

中文摘要 目 的 f胰腺癌为高度恶性肿瘤，由于进展快，发现晚，手术切除率低 等原因，人们目前不断探索其它途径治疗胰腺癌。近20年，雌激 素与胰腺肿瘤发生之间的关系引起了学者的关注。一系列的研究 表明雌激素受体不仅在乳腺、子宫、卵巢、前列腺等激素靶器官的 肿瘤中高表达，而且也在胰腺、肝脏、胃等激素效应器官中高表达。 大量试验证明它与胰腺肿瘤生物学行为的相关性。 裂点发现的，是一种原癌基因，抑制细胞凋亡，促进肿瘤的发生发 展，其表达的蛋白为Bcl一2蛋白。Bax为Bcl一2的同源蛋白，现 已证实是促进凋亡的激动蛋白。近几年研究表明：Bcl一2基因及 其产物不仅存在于B及T淋巴细胞中，也存在于其它多种细胞。 在正常胰腺组织中Bcl一2蛋白主要表达在胰腺导管上皮细胞，而 这些细胞正是胰腺癌主要起源细胞，并大量试验证明Bcl一2与胰 腺癌的相关性。 雌激素与胰腺癌的发生相关，Bcl一2与胰腺癌的发生亦相 关，那么雌激素与Bcl一2之间是否存在一定的相关性，在调节胰 腺癌的发生发展中是否存在相关性，目前尚不清楚矿本文旨在通 过抗雌激素药物三苯氧胺作用雌激素受体高表达的胰腺癌Bxpc 一3细胞，证明三苯氧胺具有抑制胰腺癌细胞生长的作用，并且可 能是通过调控Bcl一2／Bax的平衡，诱导细胞凋亡而达到抗胰腺癌 的作用，并迸一步阐明雌激素与Bcl-2在胰腺癌发生发展中存在 一定的相关性。 ? j j材料与方法 ＼、 1．细胞培养：将Bxpc一3细胞培养于含10％胎牛血清的RP- M11640培养液中，37℃，100％湿度，5％C02孵育箱内。 2．MTr法分析TAM对细胞增殖的抑制作用 接种于96孑L板上的细胞，加入不同浓度TAM，分别培养3、6、 砜，溶解甲媵沉淀，震荡30分钟后，用酶标仪540nm测吸光度值， 计算细胞生长抑制率。 3．流式细胞仪检测细胞凋亡 将106个贴壁细胞加入浓度为10。mol／L的TAM，分别作用 24、48、72、144小时后，胰酶消化，用4℃预冷的PBS吹打成单细胞 悬液，离心去上清，一20℃预冷的70％乙醇4℃固定48小时。 PBS重悬10mg／mlR· 2000转离心10分钟弃上清。2000txL Scan流式细胞仪 重悬加100／xLPI染液4℃避光染色1小时。FAC 测定荧光强度，激发波长488nm，Cellquest分析软件进行细胞周期 DNA含量分析，测亚G1期的凋亡率。重复4次，计算平均值。 4．免疫组化检测Bax、Bcl一2 Bxpc一3细胞贴壁于载玻片上，加入培养液培养24小时，加 人不同浓度的TAM，对照组给予无水乙醇，作用72小时。待作用 时间已到，制备标本，标本采用SP法免疫组化染色，胞浆为深棕黄 色为阳性细胞。各组高倍镜下不同视野随机观察200个细胞，计 算Bcl一2、Bax阳性细胞率，重复4次染色，计算均值。 5．数据处理 10．0软 数值采用均数±标准差，用t检验数据结果。用SPSS 件分析数据。 ·2· 结 果 1．MIT检测结果 通过MTT检测TAM对Bxpc一3细胞株作用后，该细胞的生 长明显受到抑制。绘制生长抑制率曲线测得3、6、9天的IC50值 10一moI／L、 10～mol／L、(2．18±0．04)X 分别为(5．03±0．08)X (1．82±0．09)X 的体外增殖有抑制作用，且呈时间、浓度依赖性。 2．流式细胞仪检测结果 经TAM