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湖北大学 酶工程实验 （课程代码） 实验教学大纲 （第2版） 生命科学学院 生化教研室 2010年7月 前 言 课程名称：酶工程实验 实验学时：16学时 适用专业：生物工程 课程性质：必修 一、实验课程简介 酶工程是生物工程的主要内容之一，是现代酶学和生物工程学相互结合而发展起来的一门新的技术学科。它将酶学、微生物学的基本原理与化工、发酵等工程技术有机结合起来，并随着酶学研究的迅速发展，特别是酶的广泛应用而在国民生产生活中日益发挥着越来越重要的作用。酶工程实验课是生物工程等本科实验教学的一个重要组成部分，通过实验教学可以加强学生对酶工程基本知识和基本理论的理解，掌握现代酶学与相关技术的有关的基本的实验原理与技能。在实验过程中要求学生自己动手，分析思考并完成实验报告。酶工程实验性质有基础性、综合性、设计（创新）性三层次。 二、课程目的 本实验课程主要根据酶工程的三大块内容即酶的生产、酶的改性与酶的应用来设计安排实验，通过这些实验内容，使学生深入理解酶工程课程的基本知识；巩固和加深所学的基本理论；掌握酶工程中基本的操作技能。同时，通过实验培养学生独立观察、思考和分析问题、解决问题和提出问题的能力，养成实事求是、严肃认真的科学态度，以及敢于创新的开拓精神；并在实验中进一步提高学生的科学素养。 三、考核方式及成绩评定标准 考核内容包括实验过程中的操作情况，实验记录及结果的准确性，实验报告的书写及结果分析，思考题的回答情况，仪器设备的使用情况及遵守实验室规章制度的情况等，根据这些方面进行成绩评判和记录，综合给出实验总成绩。 四、实验指导书及主要参考书 魏群生物工程技术实验指导高等教育出版社2002年8月 实习参观细胞发酵罐细胞培养产酶 演示性 1 必做 实验三 有机溶济沉淀法制备大豆脲酶及其活力测定、Km值测定 综合性 4 必做 实验四 尼龙固定木瓜蛋白酶 综合性 4 必做 实验五 酶工程设计性实验和考查 设计性 4 选做 合计 16 实验类型：演示性、验证性、综合性、设计性、其它 实验一、不同浓度果胶酶澄清苹果汁效果、对收得率的影响（3课时） 实验类型：验证性 实验目的： 通过实验掌握酶在食品工业上的基本应用，果胶酶作用的基本原理和果汁生产的基本工艺与过程。 实验内容： 1．制备苹果汁：将苹果洗净，切成小块，用榨汁机打碎成果汗匀浆。加热苹果汁到100℃使酶钝化后，再冷却至50℃左右。 2．配制不同浓度的酶液：取5支10mL的刻度试管，依次编为2号~6号。分别加入2mL、4mL、6mL、8mL、10mL质量浓度为10g/L的果胶酶溶液，再分别加入苹果酸定容至10mL，依次配制质量浓度为2，4，6，8，10g/L的果胶酶溶液备用。（实验老师已配好） 3．降解苹果汗：取6个号烧杯，向1号烧杯加蒸馏水1mL，向2号~6号烧杯分别加入1mL质量浓度为2，4，6，8，10g/L的果胶酶溶液。再向6只烧杯中均加入4mL蒸馏水，摇匀，然后都加入95mL经钝化的苹果汁，45℃水浴中恒温60min。 4．沉淀：向上述6只烧杯中均添加明胶约0.02g，硅溶胶约0.1mL，膨润土约0.20g，活性炭约0.05g处理，添加顺序为：明胶等主要起吸附、沉淀和过滤作用。所用物品符合食品安全要求。充分混匀后静置60min，使其充分沉淀后过滤。过滤进先用纱布初滤，并挤干，所得初滤液再抽滤。 5．记录结果 观察6个样品滤液的澄清度，用量筒测量澄清滤液（即苹果汁）的体积，将结果填入下表。 不同酶浓度下苹果汗收得率 烧杯编号 1 2 3 4 5 6 果胶酶质量浓度 0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 澄清效果 苹果汗体积（mL） 澄清苹果汁收得率（%） 实验要求： 总结不同果胶酶浓度下苹果汁的澄清效果，并观察使苹果汁获得最高收得率时所需的果胶酶浓度。分析所出现的实验结果的原因，并回答相应的实验思考题。 实验二、实习参观细胞发酵罐细胞培养产酶（1课时） 实验类型：演示性 实验目的： 了解产酶的细胞发酵罐的基本结构，掌握细胞发酵产酶时的工艺条件及进行相关调控的基本原理和方法。 实验内容： 参观发酵罐及其配套的空压机、蒸汽机、发酵罐调控主机，了解各个设备的主要功能。熟悉发酵罐的运行的基本操作，对pH、溶氧、温度、搅拌速度等重要参数动手进行设定、调节。掌握发酵罐的基本结构，内部组成、有关的通气、通水等管道走线的构造、规律等。 主要设备器材： 2）脲酶活力测定：式中：n为酶样品的稀释倍数 实验四、尼龙固定化木瓜蛋白酶（4课时） 实验类型：综合性 实验目的： 通过实验掌握酶固定化的基本原理，学习酶固定的基本方法和了解固定化酶在实际中的应用及固定化酶活力回收率及相对活