丹参对衰老鼠脑神经细胞和PC12细胞凋亡及凋亡基因分析.pdfVIP

上海第二医科大学硕士论文 丹参对衰老鼠脑神经细胞和PCI2细胞凋亡及凋亡相关基因 作用的研究 中文摘要 衰老是一个十分复杂的生物学现象，有关衰老的理论目前有 多种假设，但其确切的机理尚不清楚。其中以自由基学说，及近 年来发展的细胞凋亡学说影响较为深远。细胞凋亡受基因调控， 其中的Bcl．2家族分子是调节细胞凋亡的重要基因。在诸多细胞 凋亡的诱因中，自由基已被证实是诱导凋亡重要因素。随着增龄， 机体内自由基水平逐渐升高，而其清除机制趋向退化，氧化与抗 氧化作用失衡的结果造成体内自由基的大量积聚，导致细胞凋 亡。丹参具有很强的抗氧化作用，但是目前丹参对衰老神经细胞 凋亡及相关调控基因尚缺乏研究。本课题设计通过丹参对衰老过 程中海马神经细胞与体外培养拟神经细胞凋亡及凋亡相关基因的 检测，探讨这一问题。为进一步深入开展中药抗衰老研究提供理 论与实验依据。 本研究分为二个部分： 第一部分．丹参对去除神经生长因子(NGF)引起的PCI2 细胞凋亡的研究：将Pcl2细胞培养分为两种培养液，I液(去血 清液)及II液(血清液)。然后分为三组：(1)对照组：两组分 别加入上述两种不同的培养液。(2)NGF组：两组分别加入含NGF 的上述两种培养液，(3)丹参组：两组分别加入含丹参注射液的 上述两种培养液。应用DNA末端标记法(TUNEL)、流式细胞仪 胞凋亡的影响。 第二部分．将4月龄Wister大鼠30只随机分为3组，雌雄 各半，青年对照组：每日1次皮下注射生理盐水10ml／kg，衰老 上海第二医科大学硕士论文 组：每日给皮下注射D-半乳糖48mg／kg，丹参给药组：在每日注 射D-半乳糖的同时给丹参注射液59／kg，连续40日后断头法除 死，应用TUNEL标记、流式细胞仪定性定量分析丹参对D。半乳 糖致衰的鼠脑海马神经细胞凋亡的影响，应用免疫组织化学检测 Bel．2，Bax基因表达。 结果表明：1．PCI2细胞对照组与衰老鼠组可观察到典型的凋 亡细胞形态，且后者凋亡相关基因Bcl．2的表达减少，促进凋亡基 因Bax表达增加；2．丹参可抑制体外培养的去除NGF及去除NGF 和血清后引起的PCI2细胞凋亡，与凋亡对照组比较有明显差异 (p0，05)；3．丹参对D．半乳糖致衰的鼠脑海马神经细胞凋亡有 明显的抑制作用，与衰老对照组比较有明显差异(p0．01)；4．丹参 可明显上调抑制凋亡相关基因Bcl．2的表达，下调促进凋亡基因 Bax的表达。 本实验结论：丹参对去除NGFiJI起的PCI2细胞凋亡及衰老鼠脑 海马神经细胞凋亡有明显的抑制作用；丹参可明显上调抑制凋亡 相关基因Bcl．2的表达，下调促进凋亡基因Bax的表达；此作用与 丹参对凋亡细胞的抑制作用相一致。 关键词： 衰老神经细胞PCI2细胞丹参凋亡基因 土海第=医辩大学硬士论文 theeffectof Miltiorrhizaon and Study Salvia apoptosisexpression of in ratsbrainandPCI2cells genesaging apoptosis-associated ABSllRCT isa there Agingverycomplicatedbiologicphenomena。Although are to the of exact manyhypothesesexplainprocessaging，the mechanismsarenotwell these free defined．A