抗人肿瘤内皮细胞标志物8（TEM8）单克隆抗体的制备及其蛋白表达产物在部分肿瘤和正常组织中的分布分析.pdfVIP

抗人肿瘤内皮细胞标志物8(TEM8)单克隆抗体的制各及其 蛋白表达产物在部分肿瘤和正常组织中的分布研究 中文摘要 目的 制备特异性抗人TEM8单克隆抗体；初步观察TEM8蛋白质在各 种人体组织中的分布情况。 方法 人TEM8 肠杆菌后IPTG诱导表达TEM8融合蛋白；固化Ni2+吸附层析纯化该蛋白并作 为抗原免疫Balb／c雌性小鼠，取高效价小鼠的脾细胞与SP2／0骨髓瘤细胞融合， ELISA筛选、WesternBlot鉴定阳性杂交瘤细胞克隆。制备抗人TEM8单克隆抗 体；人正常及肿瘤组织福尔马林固定、石蜡包埋、切片(4um)、常规脱蜡至水， 37。C，孵育lh：ABC复合 杂交瘤上清37。c，孵育lh：生物素化马抗小鼠IgG 物370C，孵育50min：DAB显色。杂交瘤完全培液代替一抗作为阴性对照。 结果 成功地用原核细胞表达并纯化了大量人源性TEM8融合蛋白质； 成功筛选出分泌特异性抗人TEM8单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆5个；成功地 用所获抗人TEM8单克隆抗体检测了TEM8蛋白表达产物在部分肿瘤组织及正 常组织中的分布，结果显示TEM8蛋白质除了在结、直肠癌的少量肿瘤血管有 表达外，在结、直肠癌的癌性腺上皮细胞及癌旁正常腺上皮细胞膜上、平滑肌 细胞胞浆内、皮肤鳞状上皮细胞和少数前列腺癌上皮均有表达。 结论 成功地用原核细胞表达并纯化了大量人源性TEM8融合蛋白：成 功地制备了抗人TEM8单克隆抗体：TEM8蛋白表达产物在人体组织内的分布 并不是肿瘤血管特异性的，在多种细胞如良、恶性结直肠腺上皮及平滑肌细胞 和皮肤鳞状上皮细胞均有表达，和Croix等报道的TEM8的mRNA水平表达分 布不完全一致。 关键词肿瘤内皮细胞标志物8(TEM8) 单克隆抗体肿瘤血管新生 抑制血管新生免疫导向治疗 anti—human Marker8 of TumorEndothelial Preparation Specific and ofTEM8Proteinin Monoclonal ofDistribution Antibody Study and Tissues Normal human Malignant Abstract To anti—humantumor marker8 objective endothelial monoclonal prepare the distributionofTEM8 insome observe protein normaland antibody：To humantissues malignant human Methods TEM8cDNA vectorand intothe transform Ligate pET32b E．colistrain