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第十二章 紫外—可见分光光度法 ;§1 基本原理;单色光:只具有一种波长的光。
混合光:由两种以上波长组成的光,如白光。;;;2、吸收光谱或吸收曲线;Date;300;光的吸收定律—朗伯-比尔定律; κ与入射光波长、溶液的性质及温度有关。当这些条件一定时,κ代表单位浓度的有色溶液放在单位宽度的比色皿中的吸光度。;摩尔吸光系数ε的讨论;例1 浓度为25.0μg/50mL的Cu2+溶液,用双环已酮草酰二腙分光光度法测定,于波长600nm处,用2.0cm比色皿测得T=50.1%,求吸光系数a和摩尔吸光系数ε。已知M(Cu)=64.0。;; 定量分析时,通常液层厚度是相同的,按照比尔定律,浓度与吸光度之间的关系应该是一条通过直角坐标原点的直线。但在实际工作中,往往会偏离线性而发生弯曲。;一、物理因素;二、化学因素;;;不同透光率时测定浓度的相对误差ΔcB/cB(ΔT=0.01) ;3、参比溶液的选择;(1)如果仅待测物与显色剂的反应产物有吸收,可用纯溶剂(或蒸馏水)作参比溶液
(2)如果显色剂或其他试剂略有吸收,应用空白溶液(包括显色剂或其它试剂不加待测试样溶液)作为参比溶液。
(3)如试样中其它组分有吸收,但不与显色剂反应,则当显色剂无吸收时,可用试样溶液作为参比溶液;当显色剂略有吸收时,可在试液中加入适当掩蔽剂将待测组分掩蔽后再加显色剂,以此溶液作参比溶液。; 显色剂;;;;pH 与吸光度的关系曲线;;§4 紫外—可见分光光度计;作用:从连续光源中分离出所需要的足够窄波段的光束
常用的元件:棱镜、光栅;作用:提供能量,激发被测物质分子,使之产生电子谱带
要求 :发射足够强的连续光谱,有良好的稳定性及足够的适用寿命
类型:可见与近红外区:钨灯 400~1100nm
紫外区:氢灯或氘灯180~400nm;功能:用于盛放试样,完成样品中待测试样对光的吸收
常用的吸收池:石英(紫外区)
玻璃(可见区)
吸收池光程:1cm 、2cm、3cm等
注意:为减少光的损失,吸收池的光学面必须完全垂直于光束方向。吸收池要挑选配对,因为吸收池材料的本身吸光特征以及吸收池的光程长度的精度等对分析结果都有影响。;作用:接受、记录信号
组成:检测器、放大器和读数和记录系统
常用检测器:光电管和光电倍增管
蓝敏(锑铯)光电管 210~625nm
红敏(氧化铯)光电管 625~1000nm ;单光束分光光度计
双光束分光光度计
双波长分光光度计(相互重叠多组分分析);单光束分光光度计;一、定性分析
1. 制作试样的吸收曲线并与标准紫外光谱对照;
2. 利用Woodward-Fieser 和Scott经验规则求最大吸收波长。
即,当通过其它方法获得一系列可能的分子结构式后,可通过此类规则估算最大吸收波长并与实测值对比。;Woodward-Fieser规则估算最大吸收波长的几个实例:;二、定量分析
1. 单组份定量方法
1)标准曲线法(略)
2)标准对比法:
该法是标准曲线法的简化,即只配制一个浓度为cs的标准溶液,并测量其吸光度,求出吸收系数k,然后由Ax=kcx求出cx
该法只有在测定浓度范围内遵守L-B定律,且cx与cs大致相当时,才可得到准确结果。;2. 多组分定量方法
由于吸光度具有加合性,因此可以在同一试样中测定多个组份。
设试样中有两组份 X 和 Y,将其显色后,分别绘制吸收曲线,会出现如图所示的三种情况:
?
图a):X,Y 组份最大吸收波长不重迭,相互不干扰,可以按两个单一组份处理。
图b)和c) :X,Y 相互干扰,此时可通过解联立方程组求得X和Y的浓度:
其中,X,Y 组份在波长 ?1 和 ?2 处的摩尔吸光系数 ? 可由已知浓度的 X, Y 纯溶液测得。解上述方程组可求得 cx 及 cy。 ;3. 双波长法---等吸收点法
当混合物的吸收曲线重迭时,如右下图所示,可利用双波长法来测定。
具体做法:将 a 视为干扰组份,现要测定 b 组份。
a)?分别绘制各自的吸收曲线;
b)?画一平行于横轴的直线分别交于a组份曲线上两点,并与b组分相交;
c)?以交于 a 上一点所对应的波长 ?1 为参比波长,另一点对应的为测量波长 ?2,并对混合液进行测量,得到:
A1=A1a + A1b + A1s
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