核苷酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体质粒构建及其对肺腺癌A549细胞株功能影响分析.pdfVIP

竺!壁苎查雯竺叠堡雯堕———————!望尘坚竺竺苎 核菩酸切除修复基因XPD反义RNA表达载体质粒 构建及其对肺腺癌A549细胞的功能研究 摘要 ／DNA是生物遗传信息的重要携带者，它的完整性与否直接关系到生命体生命信 息的延伸，是细胞存活的基本条件。而就是DNA其本身却极易受到来自内源或外源 的有害因子的不断地干扰，多种物理或化学以及生物因素，诸如紫外线、电离辐射、 化学诱变剂和病毒等可损伤细胞DNA，除此之外，还受到自身双螺旋化学键内在不 稳定性的影响。如果DNA损伤得不到及时和有效的修复，细胞将发生基因突变和癌 变等严重后果，DNA损伤修复与遗传缺陷性疾病、肿瘤、衰老等的关系早己为人们 所熟知。 总的来说，先天性的DNA修复系统缺陷将导致对特定物质的高敏感性，遗传不 稳定性，肿瘤易感性以及早年老龄化；突变的时间依赖性累积和持续性损伤将不可避 免地导致细胞乃至机体功能的恶化，并且这种过程可能直接导致一般性的衰老。正如 我们所知，肿瘤的发生发展是多基因、多阶段作用的结果；个体对致癌物质反应的遗 传多态性是其肿瘤易感性的重要因素之一。为了确保遗传的稳定性，所有生物都已经 进化了一套复杂的互补性的DNA修复系统，这种系统实际上能够移除各种类型的 DNA损伤。现在已知哺乳类细胞至少有四个重要的DNA修复系统，即核苷酸切除修 复系统、碱基切除修复系统、错配修复系统和DNA烷基转移酶系统。 先天性的NER缺陷通常导致三种遗传性临床综合症，这三种综合症都以对紫外 线敏感性增高为主要特征，分别是着色性干皮病()(P)，科凯恩综合征(Cs)，毛发硫营 XPG，其中XPD是一不均一群体；临床观察，暴露于紫外线下XP患者的皮肤显示 了色素沉着异常，早期衰老体症以及高于正常人1000倍的肿瘤易感性，这些异常均 是由于构成NER的七个基因组分(从XPA到XPG)中的一个或多个缺陷而导致。 兰!塑苎查雯箜兰墨篁竺 一一二坠l坠!!!兰 在这乇个基因缰分中，XPD基因突交可以呈现上述三稀褡霖表鍪，并盈XPD蛩自在 核萤酸切除修复系统以及硷基转添过程中均起霾要作用；匿此XPD基因不同的突变 将可能在不同程度上影响核苷酸切除修复和转录活性从而导致不同的l临床表型。RNA 聚合酶转录魏子lI 双功能复合物，可以诱导打开DNA双螺旋结构，且凭借其中XPB和XPD亚单位可 ＼ 以拥有双向解旋酶的功能。) t，4一 ^／。 崧本磷究中，我们针辩NER税裁七个基因组分之一XPD使用反义梭黢技术，以 达到抑制其在肿瘤纲腮中表达的弱的，从两挪铡NER枫制并且也挪截与修复系绞提 联系的其他细胞功能的正常行使，诸如细胞周期。并且近期的研究资料液明，针对 NER以及XPD基因进行爱义核酸干预的文献势不是缀多，假是反义核酸技术却已是 比较成熟的，正是因为如此，将一个比较成熟的方法废用予寒知数领域是谍题、蜜验 设计中较好的途径。 f首先，针对露静基因的反义袋粒褐建并且转染秀率瘸细胞成功：麓次，使用转染成 ＼ 功后的新型脖瘪细胞进行Northern杂交以检测转染蜃艟瘗缨腿XPD表达瓣变化；再 次，使用转染成功厝的细胞SCGE、MTT等细胞毒性药物敏感性实验，研究其抗药 往在转染翦后的变化；最蕊，迸行Western Blot检铡相关蛋白缅稳周辩素D1的寝达 爨在转染缨胞翦后有无变化以及变化敕程度。≥p／＼ ． ／ 主溪研究结果以及结论：各项细胞功能性实验均袭明在转染细胞后，XPD液达 降低，瓣瘤缅胞的抗蒴性下降，缅胞周掰素D1也随XPD的}羁j筋黼表达降低，说明 He：=，‘’o…一 XPD在NER中占重要终鼹，若其液达黪低霹鼓壹接影睫到NER援涮，嚣在NER系 统之外的其他修复系统，XPD则并无明熙影响，且XPD可以直接或间接影响细胞周 潮调节机制中的关键成分细胞周期素D1的表达，提示NER与细胞周期调节必定存在 联系，可滥作为今爱的磅突方彝之一。 关键词：DNA修复7№强修复系统jXPD?细胞周期素D，及义核酸芦 刀予稼螽?